家蠶核糖體蛋白基因的染色體定位研究.pdf

1、家蠶的飼養(yǎng)歷史悠久，以家蠶為主體的產(chǎn)業(yè)及其附屬產(chǎn)業(yè)一直是我國的傳統(tǒng)優(yōu)勢產(chǎn)業(yè)，家蠶是全變態(tài)型的昆蟲，各種性狀易于觀察，研究過程中積累了大批遺傳變異的品系，加上家蠶的多化性，其雌性個體所產(chǎn)后代數(shù)量很大，有利于遺傳學(xué)研究和突變體的篩選。家蠶作為鱗翅目昆蟲的典型代表和理想的生物學(xué)模型。在應(yīng)用上，除了蠶絲之外，家蠶還作為理想的生物反應(yīng)器也日益受到重視。此外，大部分為害農(nóng)林作物的害蟲與家蠶同屬于鱗翅目，對家蠶功能基因組的研究將直接推動對鱗翅目昆蟲的

2、比較生物學(xué)等相關(guān)研究，有利于提高鱗翅目昆蟲的綜合治理水平。 中國完成了對家蠶基因組草圖的測序工作，隨之而來的是開展以增加遺傳圖譜密度、基因定位克隆、基因組精細圖譜構(gòu)建為主要內(nèi)容的研究，同時還有功能基因組的研究。據(jù)統(tǒng)計目前已經(jīng)定位在染色體上的基因較少，給基因的定位克隆和功能研究帶來了困難，因此篩選更多的分子標記顯得非常重要。 核糖體蛋白基因(RPG)在蛋白合成中的作用十分重要。由于核糖體蛋白數(shù)量眾多，功能復(fù)雜，以及研究手段

3、的限制，其參與生命調(diào)控的作用機制還沒有完全了解。近年來研究表明，核糖體還是藥物作用的重要靶位，核糖體蛋白逐漸成為研究的熱點。2001年，Uechi等成功繪制出了人類全部80條核糖體蛋白基因的遺傳物理圖譜，將80條核糖體蛋白基因定位于2條性染色體和20條常染色體上。然而對于家蠶核糖體蛋白基因的染色體定位工作還缺少進一步的相關(guān)研究。 為此，本研究以PCR為核心技術(shù)，進行分子標記的篩選工作，試驗巧妙的利用家蠶的雌不交換特性，結(jié)合SSR

4、分子標記遺傳連鎖圖譜，將家蠶部分核糖體蛋白基因定位到相應(yīng)的染色體上，為基因的進一步精細定位和定位克隆奠定了基礎(chǔ)。試驗用家蠶品種7019和F50B配制了新的回交種群，抽提了大小群體中200多個個體的基因組DNA。在Genbank上得到了家蠶80個核糖體蛋白基因的核酸序列，并結(jié)合生物信息的方法找到了每個核糖體蛋白基因?qū)?yīng)的Scaffold，以Scaffold為參考序列，每個對應(yīng)基因設(shè)計出相應(yīng)的特異引物，使用TD-PCR的方法進行特異性擴增，

5、并對沒有多態(tài)性的PCR擴增產(chǎn)物進行了酶切試驗分析，試驗共獲得了14個新的分子標記，通過新標記和SSR遺傳連鎖圖譜的結(jié)合，將14個核糖體蛋白基因定位到了家蠶的10條染色體上。本研究的開展，有利于加快我國家蠶基因組學(xué)研究的進程；有利于家蠶新基因的發(fā)現(xiàn)和定位克??；有利于核糖體蛋白基因的進一步深入研究；有利于推動鱗翅目昆蟲的模式生物研究，為鱗翅目昆蟲功能基因組研究和系統(tǒng)生物學(xué)研究奠定基礎(chǔ)，在家蠶全基因組精細圖譜尚未完成的情況下，這項工作的開展具