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1、華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文硫氧還蛋白1的生物學(xué)功能研究對(duì)肝癌細(xì)胞HepG2和炎性細(xì)胞U937的影響姓名:唐文心申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:博士專業(yè):生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師:陳正望20090705華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文酸序列的第100位蘇氨酸(ThrT)突變?yōu)樘於0罚ˋsnN),構(gòu)建了兩種真核表達(dá)載體pcDNATrx和pcDNAmuTrx,并分別建立了穩(wěn)定表達(dá)Trx1和muTrx1的HepG2細(xì)胞系。用不同抗癌藥刺激轉(zhuǎn)染細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染muTrx
2、1的細(xì)胞對(duì)藥物的敏感性增強(qiáng)了,更容易發(fā)生凋亡。同時(shí)發(fā)現(xiàn)muTr1分子結(jié)合ASK1(凋亡信號(hào)激酶1)的能力下降了。這表明Trx蛋白分子100位的“T”的磷酸化有利于其發(fā)揮抗凋亡的生物活性,其可能的機(jī)制是T100的磷酸化有助于Trx1和ASK1的結(jié)合。這對(duì)于開發(fā)針對(duì)Trx磷酸化的抗腫瘤藥物提供了新的思路。隨著炎癌鏈概念的提出,Trx1也開始因其在各種炎癥或應(yīng)激疾病以及在炎癥通路中的作用而受到關(guān)注。而一種新的多功能炎性蛋白DTAIF1被發(fā)現(xiàn)于
3、Ⅰ型糖尿病自身免疫反應(yīng)的胰腺炎組織和慢性移植排斥反應(yīng)的同種大鼠異體移植的心臟中,能促進(jìn)多種炎癥細(xì)胞,包括巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的增殖、遷移和分泌。為探討Trx1與DTAIF1的相互調(diào)節(jié)關(guān)系,我們進(jìn)行了如下研究:將重組質(zhì)粒pcDNAAIF1轉(zhuǎn)染人單核白血病細(xì)胞株U937,與對(duì)照組相比,發(fā)現(xiàn)DTAIF1水平的升高,但并不影響細(xì)胞內(nèi)Trx1的水平。而外源添加DTAIF1卻能顯著提高胞內(nèi)Trx1水平。將兩個(gè)重組質(zhì)粒pcDNATrx和pcD
4、NANLSTrx分別轉(zhuǎn)染人細(xì)胞株U937,均能顯著提高細(xì)胞內(nèi)DTAIF1的蛋白水平及細(xì)胞的DTAIF1的分泌;同時(shí)發(fā)現(xiàn),胞質(zhì)中Trx1對(duì)DTAIF1的轉(zhuǎn)錄水平?jīng)]有影響,而細(xì)胞核內(nèi)的Trx1則可以使DTAIF1的mRNA水平顯著提高。這說(shuō)明不同的亞細(xì)胞定位的Trx1對(duì)DTAIF1的調(diào)控方式是有差異的:胞質(zhì)中的Trx1在翻譯水平正調(diào)控DTAIF1,而Trx1入核后在轉(zhuǎn)錄水平對(duì)DTAIF1進(jìn)行正調(diào)控。以上研究結(jié)果表明,細(xì)胞內(nèi)的Trx1促進(jìn)了D
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