RNAi沉默CtBP1基因對人肝癌細胞株HepG2生物學行為的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的: 通過觀察siRNA對人肝癌細胞株HepG2內CtBP1基因及其靶基因E-cadherin表達的影響,和對HepG2細胞增殖、細胞周期、凋亡及侵襲力的影響,初步探導CtBP1基因在調節(jié)肝癌發(fā)生發(fā)展中的可能作用。為進一步研究肝癌或其他腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機制及治療靶基因尋找的研究提供理論基礎。
　　方法: 采用X-tremeGENE siRNA Transfection Reagent為載體介導Control siRNA(Flu

2、orescein Conjugate)-A轉染入HepG2細胞,在倒置熒光相差顯微鏡下觀察,觀測轉染效率。實驗分空白對照組、轉染試劑對照組、陰性序列對照組及干擾組,以 X-tremeGENE siRNA Transfection Reagent為載體介導Control siRNA-A與CtBP1 siRNA(h)轉染入HepG2細胞,RT-PCR法和Western Blot法分別從核酸水平和蛋白質水平檢測CtBP1基因與E-cadher

3、in基因的表達情況;MTT法檢測HepG2細胞增殖的情況;流式細胞術檢測HepG2細胞周期與凋亡的變化;Transwell小室法檢測HepG2細胞侵襲力的變化。
　　結果: 觀察到siRNA轉染入HepG2細胞,轉染效率達85％以上;與3個對照組相比,干擾組CtBP1mRNA及CtBP1的表達水平下調,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05),CtBP1mRNA抑制率達38.11%,蛋白制率達62.39%,3個對照組之間的差異無統(tǒng)計學意

4、義(P>0.05);與3個對照組相比,干擾組E-cadherin mRNA及E-cadherin的表達水平上調,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05),3個對照組之間的差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05);與對照組相比,干擾組細胞增殖明顯受到抑制,生長抑制率在轉染后24、48、72、96h分別平均達到22.34%,52.15%,53.97%和54.77%,3個對照組之間細胞增殖的差異不具有統(tǒng)計學意義(P>0.05);空白對照組、轉染試劑對照組、

5、陰性序列對照組及干擾組之間細胞周期各時相細胞數(shù)的差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05);與對照組相比,干擾組的細胞凋亡率明顯升高,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05),對照組之間細胞凋亡率的差異不具有統(tǒng)計學意義(P>0.05);與對照組相比,干擾組平均每高倍視野下穿膜細胞數(shù)明顯減少,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05),3個對照組之間穿膜細胞數(shù)的差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　結論: CtBP1 siRNA(h)已轉染入人肝癌細胞

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