Notch1表達(dá)失調(diào)對(duì)肝癌細(xì)胞HepG2生物學(xué)行為的影響.pdf

1、目的：Notch信號(hào)通路在腫瘤扮演癌基因或抑癌基因作用，但其在肝癌中的作用存在爭(zhēng)論。本實(shí)驗(yàn)探討Notch1-Hes1/Hes2信號(hào)通路對(duì)肝癌細(xì)胞HepG2增殖能力、細(xì)胞周期、遷移侵襲能力的影響。
　　 方法：用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法分別用含有Notch1胞內(nèi)段質(zhì)粒與Notch1干擾RNA轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞HepG2，篩選出穩(wěn)定的細(xì)胞系Notch1過(guò)表達(dá)細(xì)胞、空載體組細(xì)胞、Notch1干擾組細(xì)胞。MTT比色測(cè)定各組細(xì)胞增殖能力;流式細(xì)胞儀測(cè)定各組

2、細(xì)胞細(xì)胞周期;Transwell檢測(cè)細(xì)胞遷移能力;Matrigel侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力;用RT-PCR檢測(cè)Notch1、Hes1和Hes2基因的表達(dá);Western印跡法檢測(cè)Notch1、Hes1和Hes2蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果：RT-PCR測(cè)定Notch1mRNA水平和Western測(cè)定Notch1蛋白表達(dá)水平結(jié)果表明我們成功轉(zhuǎn)染并篩選出穩(wěn)定細(xì)胞系Notch1過(guò)表達(dá)細(xì)胞、空載體組細(xì)胞、Notch1干擾組細(xì)胞;MTT結(jié)果顯

3、示Notch1過(guò)表達(dá)組細(xì)胞相對(duì)空載體組及未處理組的細(xì)胞增殖能力顯著減弱;而干擾組的細(xì)胞相對(duì)空載體組及未處理組細(xì)胞增殖能力明顯增強(qiáng);流式細(xì)胞儀結(jié)果顯示Notch1過(guò)表達(dá)組相對(duì)空載體組及未處理組在G1期細(xì)胞明顯增多;干擾組相對(duì)于對(duì)照組在G1期的細(xì)胞明顯減少。遷移侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示過(guò)表達(dá)組相對(duì)于空載體組及未處理組遷移侵襲能力減弱;而干擾組相對(duì)于對(duì)照組遷移侵襲能力增強(qiáng)。RT-PCR及Westernblot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示過(guò)表達(dá)組相對(duì)于空載體組及未處理