FAT對腫瘤血管生成和腫瘤轉(zhuǎn)移的影響.pdf

1、海洋生物體內(nèi)含有眾多的海洋生物活性物質(zhì)，這是一個重要的天然藥物資源。海洋生物活性物質(zhì)抗腫瘤研究是新型抗癌藥物開發(fā)和研究的一個重要領(lǐng)域。福安泰(FAT)是本實驗室從海洋生物中分離出來的一種海洋生物活性成分，初步研究發(fā)現(xiàn)其具有強的抗癌生物活性。在此基礎(chǔ)上，有必要對FAT抗腫瘤活性及機理進行深入系統(tǒng)的研究。 腫瘤增殖生長后通過侵襲和轉(zhuǎn)移擴散到遠(yuǎn)端組織或器官是癌癥病人死亡的主要原因。腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移是一復(fù)雜的過程，其基本過程包括：原發(fā)瘤增殖

2、生長，腫瘤血管生成，腫瘤細(xì)胞侵襲鄰近的基底膜和細(xì)胞外基質(zhì)，進入淋巴道或血道并隨淋巴液或血液到達(dá)遠(yuǎn)處部位的微血管，穿出血管進入繼發(fā)組織或器官并增殖生長，形成轉(zhuǎn)移灶并可繼續(xù)轉(zhuǎn)移形成新的轉(zhuǎn)移灶。 腫瘤生長和轉(zhuǎn)移都依賴血管生成，這是由美國哈佛醫(yī)學(xué)院FolkmanJ博士發(fā)現(xiàn)的，并被一系列的研究所證實。因此，控制腫瘤的血管生成，不僅可以抑制原發(fā)瘤的生長，而且可以阻止腫瘤的轉(zhuǎn)移。近年來，以腫瘤血管生成為靶點的抗血管生成療法已是腫瘤治療的研究熱

3、點之一。 腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移機制在細(xì)胞和分子水平上已取得了一定得進展。Liotta等提出侵襲過程分為“三步”：粘附、降解細(xì)胞外基質(zhì)、運動。上述三步重復(fù)進行，使得腫瘤細(xì)胞持續(xù)侵襲直至遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。腫瘤的轉(zhuǎn)移受腫瘤轉(zhuǎn)移促進基因和腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因的調(diào)控。腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的治療對策，在于特異性的阻斷其各個步驟。因此，根據(jù)Liotta提出的三步法則，抑制粘附、抗運動、抑制蛋白水解酶的分泌或其活性的物質(zhì)，能有效抑制腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移。 本研究旨在探

4、討FAT對腫瘤細(xì)胞誘導(dǎo)的血管生成的影響，對腫瘤細(xì)胞粘附、侵襲及腫瘤體內(nèi)轉(zhuǎn)移能力的影響，并對其可能的機理進行研究。 方法： 1.建立雞胚絨毛尿囊膜(CAM)模型，檢測FAT對人低分化鼻咽癌細(xì)胞(CNE-2Z)誘導(dǎo)的血管生成的影響。 2.相關(guān)基底膜成分粘附實驗、重組基底膜侵襲實驗、Transwell小室趨化運動實驗研究FAT對人高轉(zhuǎn)移卵巢癌(HO-8910PM)細(xì)胞的粘附、侵襲和運動能力的影響。 3.明膠酶譜

5、法檢測FAT對HO-8910PM細(xì)胞Ⅳ型膠原酶的分泌量及Ⅳ型膠原酶活性的影響。 4.小鼠Lewis肺癌裸鼠移植瘤轉(zhuǎn)移模型檢測FAT對腫瘤生長與轉(zhuǎn)移能力的影響。 5.B16小鼠黑色素瘤裸鼠轉(zhuǎn)移模型檢測FAT對腫瘤轉(zhuǎn)移能力的影響。 6.免疫組化法檢測FAT對腫瘤組織中微血管密度(MVD)和轉(zhuǎn)移促進基因c-erbB-2表達(dá)的影響。 結(jié)果：1.雞胚絨毛尿囊膜(CAM)實驗結(jié)果顯示，F(xiàn)AT能夠抑制人低分化鼻咽癌細(xì)胞

6、(CNE-2Z)誘導(dǎo)的CAM的血管生成，且呈劑量依賴性，0.6×102、108×102、5.4×102μg·ml-1FAT的抑制率分別為10.9％、28.3％、33.9％。 2.FAT(20、40、60μg·ml-1)處理HO-8910PM細(xì)胞24h，降低HO-8910PM細(xì)胞對Matrigel的粘附，抑制率分別為14.72％、34.27％、40.52％；降低HO-8910PM細(xì)胞對FN的粘附，抑制率分別為15.06％、27.9

7、9％、54.05％。 3.FAT(20、40、60μg·ml-1)處理HO-8910PM細(xì)胞24h，對HO-8910PM細(xì)胞侵襲能力的抑制率分別為8.55％、14.96％、21.79％。FAT(20、40、60μg·ml-1)處理HO-8910PM細(xì)胞24h，對HO-8910PM細(xì)胞運動能力的抑制率分別為6.13％、12.07％、17.84％。 4.FAT(20、40、60μg·ml-1)降低HO-8910PM細(xì)胞MMP

8、-9的分泌量及其活性，且呈一定的劑量依賴關(guān)系。 5.BALB/c裸小鼠灌胃FAT(10、20、30mg·kg-1·d)連續(xù)14天，對荷瘤裸鼠的體重?zé)o明顯的影響。 6.BALB/c裸小鼠背部皮下接種Lewis肺癌細(xì)胞，發(fā)生自發(fā)性肝轉(zhuǎn)移。BALB/c裸小鼠尾靜脈接種B16小鼠黑色素瘤細(xì)胞，發(fā)生實驗性肝轉(zhuǎn)移。 7.FAT可明顯抑制小鼠Lewis肺癌裸鼠移植瘤的生長，F(xiàn)AT(10、20、30mg·kg-1·d)對腫瘤生長

9、的抑制率分別為20.5％、46.2％、61.5％。 8.FAT(10、20、30mg·kg-1·d)對小鼠Lewis肺癌自發(fā)性肝轉(zhuǎn)移抑制率分別為25.9％、55.0％、82.8％；對B16小鼠黑色素瘤細(xì)胞實驗性肝轉(zhuǎn)移抑制率分別為42.1％、64.2％、89.1％。 9.免疫組化實驗結(jié)果顯示，F(xiàn)AT灌胃使小鼠Lewis肺癌移植瘤組織中微血管密度(MVD)明顯降低；轉(zhuǎn)移促進基因c-erbB-2表達(dá)顯著降低。 結(jié)論：

10、 1.FAT抑制人低分化鼻咽癌CNE-2Z細(xì)胞誘導(dǎo)的雞胚絨毛尿囊膜(CAM)血管生成，其抑制效果與劑量呈正相關(guān)。 2.FAT顯著抑制人高侵襲卵巢癌HO-8910PM細(xì)胞對Matrigel、纖維粘連蛋白的粘附，且與劑量相關(guān)；FAT降低HO-8910PM細(xì)胞侵襲人工重組基底膜能力和對FN的趨化性運動能力。FAT對HO-8910PM細(xì)胞侵襲能力的影響，與其降低HO-8910PM細(xì)胞的粘附能力、運動能力及其Ⅳ型膠原酶的分泌量及其活

11、性有關(guān)。 3.FAT對BALB/c裸小鼠無明顯的毒副作用。 4.FAT抑制BALB/C裸小鼠移植性Lewis肺癌的生長及其自發(fā)性肝轉(zhuǎn)移。 5.FAT抑制B16小鼠黑色素瘤細(xì)胞實驗性肝轉(zhuǎn)移。 6.FAT降低小鼠Lewis肺癌組織中的微血管密度(MVD)。 7.FAT下調(diào)LLC細(xì)胞中轉(zhuǎn)移促進基因c-erbB-2的表達(dá)。 8.綜合體內(nèi)外實驗結(jié)果，F(xiàn)AT對腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的影響與其抑制腫瘤血管生成、