松蘿酸對腫瘤血管生成及bFGFR1-HSPG介導的信號通路影響.pdf

1、目的：通過研究松蘿酸對腫瘤血管及bFGFR1/HSPG介導的信號傳導通路的影響，探討松蘿酸對腫瘤血管生成影響，為松蘿抗腫瘤臨床應用及松蘿酸抑制腫瘤血管生成新藥研發(fā)提供實驗依據(jù)。
　　方法：選取松蘿酸為受試物，以H22荷瘤小鼠模型作為受試對象，通過HE染色腫瘤組織切片，免疫組織化學檢測病理指標MVD，ELISA法檢測小鼠血清中的VEGF、bFGF表達。WB免疫印跡法檢測PCNA表達，RT-PCR檢測bFGFR1、HSPG mRNA表

2、達，研究松蘿酸在體實驗中對腫瘤生長和血管生成的影響，并初步探討其作用機制。通過CCK-8法研究不同濃度松蘿酸對HUVEC增殖影響，初步確定最佳松蘿酸給藥濃度；采用流式細胞術(shù)檢測松蘿酸對HUVEC周期和凋亡率的影響，ELISA法檢測HUVEC VEGF、bFGF分泌水平，采用RT-PCR技術(shù)檢測HUVEC的bFGFR1、HPSG mRNA表達，及通過WB測定PCNA、bcl-2、Bax表達。
　　結(jié)果：在體實驗中，松蘿酸組小鼠腫瘤體

3、積、質(zhì)量增長速度較模型組緩慢（P<0.05），小鼠腫瘤組織的HE染色結(jié)果顯示松蘿酸組小鼠腫瘤組織的病理損害程度明顯低于模型組，同時免疫組化實驗結(jié)果顯示松蘿酸組的腫瘤組織MVD（陽性相對區(qū)域160249±1256）顯著減少（P<0.05），分子水平實驗結(jié)果中，WB法檢測顯示松蘿酸組PCNA蛋白表達明顯低于模型組（P<0.05）。松蘿酸可顯著降低小鼠血清bFGF和VEGF表達水平（P<0.01），RT-PCR檢測顯示松蘿酸組bFGF受體bF

4、GFR1、HSPG基因表達明顯低于模型組。此外，體外實驗中，CCK-8法實驗得出松蘿酸可顯著抑制HUVEC增殖，并且可促進HUVEC凋亡，WB法檢測顯示松蘿酸組PCNA、bcl-2蛋白表達明顯低于模型組，Bax蛋白表達水平明顯高于模型組，并且可促進HUVEC凋亡，ELISA結(jié)果顯示松蘿酸可顯著降低HUVEC上清培養(yǎng)基bFGF和VEGF濃度（P<0.01），RT-PCR法研究松蘿酸對HUVEC bFGF兩個受體的影響，檢測顯示松蘿酸組bF