中藥注射劑調(diào)控腫瘤血管生成信號(hào)傳導(dǎo)通路的機(jī)制研究.pdf

1、中醫(yī)藥治療腫瘤歷史悠久。近年來(lái)，中醫(yī)藥日益成為腫瘤綜合治療的重要組成部分。中藥的療效特點(diǎn)與化療藥物有明顯不同。抑制腫瘤血管生成為探討中藥作用機(jī)制提供了一個(gè)新思路，深入開(kāi)展相關(guān)研究對(duì)豐富中醫(yī)抗腫瘤理論，提高臨床水平，促進(jìn)中醫(yī)藥現(xiàn)代化是一項(xiàng)有益的探索?！　∫酝芯匡@示：腫瘤生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移與腫瘤血管生成關(guān)系密切。在腫瘤生長(zhǎng)的最初階段可以通過(guò)擴(kuò)散的方式吸收營(yíng)養(yǎng)，但當(dāng)腫瘤的體積達(dá)到2-3mm3以上時(shí)就必須依賴(lài)新生血管為其繼續(xù)增殖提供必需的氧氣和營(yíng)養(yǎng)

2、物質(zhì)。另一方面隨著腫瘤血管數(shù)目的增加，也加大了腫瘤細(xì)胞進(jìn)入循環(huán)的機(jī)會(huì)，使其較容易通過(guò)血管向遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，同時(shí)新生的血管內(nèi)皮和基底膜存在缺陷，使腫瘤細(xì)胞更易于穿越基底膜屏障進(jìn)入血液循環(huán)，發(fā)生轉(zhuǎn)移。因此理論上講，抑制腫瘤血管生成就會(huì)切斷腫瘤的營(yíng)養(yǎng)供給和轉(zhuǎn)移的重要通路。目前，以腫瘤血管為靶點(diǎn)的研究已引起學(xué)術(shù)界的廣泛關(guān)注。 腫瘤血管生成是一個(gè)多因素參與，多步驟復(fù)雜的過(guò)程，其中血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖是影響腫瘤血管生成的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞增

3、殖通過(guò)特定的信號(hào)傳導(dǎo)機(jī)制調(diào)控：包括腫瘤組織分泌血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)并與位于血管內(nèi)皮細(xì)胞膜上的相應(yīng)受體(VEGFR)結(jié)合，激活位于胞漿中的蛋白激酶C(PKC)大量表達(dá)，蛋白激酶C進(jìn)而激活位于其下游的有絲分裂激活蛋白激酶(MAPK)大量表達(dá)，有絲分裂激活蛋白激酶可以直接將增殖信號(hào)會(huì)聚傳遞到核內(nèi)并啟動(dòng)增殖程序，即由VEGF→VEGFR→PKC→MAPK→血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖構(gòu)成了一條調(diào)控腫瘤血管形成的重要信號(hào)傳導(dǎo)通路?！　】等R特、華蟾素

4、是臨床常用的治療腫瘤中藥注射劑，應(yīng)用廣泛，療效確切。我們?cè)陬A(yù)實(shí)驗(yàn)中通過(guò)采用雞胚尿囊膜實(shí)驗(yàn)初步證實(shí)康萊特、華蟾素具有一定的抑制腫瘤血管生成作用，但其具體機(jī)制尚需進(jìn)一步研究?！　”疚闹荚谔接懣等R特、華蟾素抑制腫瘤血管生成作用及其通過(guò)調(diào)控VEGF/VEGFR、PKC-MAPK信號(hào)傳導(dǎo)通路抑制腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖的機(jī)制。三、研究?jī)?nèi)容1.康萊特、華蟾素抑制腫瘤血管生成的體內(nèi)研究本實(shí)驗(yàn)從整體水平探討康萊特、華蟾素通過(guò)降低荷瘤小鼠瘤內(nèi)血管密度(MV

5、D)發(fā)揮抑制腫瘤血管生成作用，以及血管生成與腫瘤生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系?！　〗Y(jié)果顯示：康萊特組、華蟾素組對(duì)Lewis肺癌小鼠瘤內(nèi)血管密度(MVD)均有明顯的抑制作用，與生理鹽水組比較有明顯差異(P＜0.05)。康萊特高劑量組、華蟾素高、中劑量組、參一組對(duì)Lewis肺癌小鼠移植瘤有一定的抑制作用，與生理鹽水組比較有明顯差異(P＜0.05)，其中康萊特的抑瘤率在7％-19％之間，華蟾素的抑瘤率在12％-31％之間?？等R特高、中劑量組、華蟾素

6、高劑量組、參一組對(duì)Lewis肺癌小鼠肺轉(zhuǎn)移有明顯的抑制作用，與生理鹽水組比較有明顯差異(P＜0.05)。其中康萊特組抑制率在44％-72％之間，華蟾素組抑制率在23％-60％之間?！　∩鲜鼋Y(jié)果提示：康萊特、華蟾素對(duì)腫瘤血管生成有明顯抑制作用，其抑制腫瘤血管生成可以減少轉(zhuǎn)移，同時(shí)能在一定范圍內(nèi)控制腫瘤生長(zhǎng)，保持瘤體穩(wěn)定。2.康萊特、華蟾素抑制腫瘤血管生成的體外研究　　本實(shí)驗(yàn)通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)從細(xì)胞水平探討康萊特、華蟾素通過(guò)抑制腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)

7、胞增殖發(fā)揮抑制腫瘤血管生成作用?！　〗Y(jié)果顯示：康萊特、華蟾素對(duì)經(jīng)VEGF165處理的血管內(nèi)皮細(xì)胞有明顯抑制作用，而對(duì)正常條件下的血管內(nèi)皮細(xì)胞沒(méi)有明顯抑制作用?？等R特對(duì)經(jīng)VEGF165處理的血管內(nèi)皮細(xì)胞的IC50為10μg/ml，華蟾素的IC50為0.1μg/ml，與生理鹽水組比較有明顯差異(P＜0.05)。　　上述結(jié)果提示：康萊特、華蟾素抗腫瘤血管生成作用與抑制腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖有關(guān)。3.康萊特、華蟾素調(diào)控VEGF/VEGFR、P

8、KC-MAPK信號(hào)傳導(dǎo)機(jī)制研究　　本實(shí)驗(yàn)從分子水平探討康萊特、華蟾素通過(guò)調(diào)控VEGF/VEGFR、PKC-MAPK信號(hào)傳導(dǎo)通路，抑制腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖的機(jī)制?！　〗Y(jié)果顯示：康萊特、華蟾素對(duì)Lewis肺癌小鼠腫瘤組織VEGF165表達(dá)有明顯抑制作用，與生理鹽水組比較有明顯差異(P＜0.05)。經(jīng)VEGF165處理的血管內(nèi)皮細(xì)胞比正常條件下細(xì)胞中VEGFR、PKC、MAPK蛋白表達(dá)明顯增強(qiáng)，兩者差異顯著(P＜0.01)，康菜特、華蟾素

9、能明顯降低經(jīng)VEGF165處理過(guò)的血管內(nèi)皮細(xì)胞中VEGFR、PKC、MAPK蛋白表達(dá)，與生理鹽水組比較有明顯差異(P＜0.05)，與正常條件下內(nèi)皮細(xì)胞中的相關(guān)蛋白表達(dá)水平比較沒(méi)有差異(P＞0.05)?！　∩鲜鼋Y(jié)果提示：康萊特、華蟾素抗腫瘤血管生成作用與調(diào)控VEGF/VEGFR、PKC-MAPK信號(hào)傳導(dǎo)通路，抑制腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖有關(guān)?！　”狙芯渴窃谏鲜鰧?shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，通過(guò)檢測(cè)55例肺癌患者血中VEGF水平進(jìn)一步探討康萊特、華蟾素在臨

10、床上對(duì)腫瘤血管生成的抑制作用，以及患者血中VEGF水平與瘤體變化，生活質(zhì)量之間的關(guān)系。結(jié)果顯示：康萊特、華蟾素能明顯降低患者血中VEGF水平，治療前后比較有明顯差異(P＜0.05)，與化療組比較也有明顯差異(P＜0.05)。在瘤體變化方面，康萊特、華蟾素與化療組比較，對(duì)腫瘤緩解率(CR+PR)較低，分別為0％、11.76％與20.0％；腫瘤有效穩(wěn)定率(CR+PR+NC)較高，分別為61.11％、64.70％與55.00％；但由于雙察病例

11、數(shù)較少，康萊特、華蟾素與化療組比較，統(tǒng)計(jì)學(xué)上未見(jiàn)明顯差異(P＞0.05)?？等R特、華蟾素能顯著提高患者生活質(zhì)量(卡氏評(píng)分、體重)，與化療組比較差異明顯(P＜0.05)?！　∩鲜鼋Y(jié)果提示：康萊特、華蟾素可以降低患者血中VEGF水平，減少腫瘤血管生成，進(jìn)而一定程度上抑制腫瘤生長(zhǎng)，提高患者生活質(zhì)量?！　”疚氖状瓮ㄟ^(guò)體內(nèi)、體外實(shí)驗(yàn)和臨床研究三個(gè)不同角度證實(shí)康萊特、華蟾素具有抑制腫瘤血管生成作用?！　”疚氖状巫C實(shí)通過(guò)調(diào)控VEGR/VEGFR