復爾康注射液抗腫瘤活性研究及對血管生成的影響.pdf

1、目的：復爾康注射液是從中藥青蒿中提取出有效成分青蒿油,與甘草酸銨和維A酸組合研制成的能供靜脈給藥的多相脂質(zhì)體注射液。前期研究結(jié)果顯示復爾康注射液能明顯抑制人肝癌HepG2細胞的增殖,誘導其凋亡,且能不同程度減弱HepG2細胞VEGF的分泌表達。本研究檢測了復爾康注射液的體外、體內(nèi)抗腫瘤活性,以及體外對腫瘤血管生成的影響,旨在進一步闡明復爾康注射液的抗腫瘤活性及其分子機制,為復爾康注射液的在腫瘤治療中的應用提供科學的實驗依據(jù)。方法：(1)

2、體外抗腫瘤活性:以人紅白血病細胞K562、人肝癌細胞SMMC-7721、人肝癌細胞BeL-7402、人結(jié)腸癌細胞HCT116和人黑色素瘤細胞KB為細胞模型,采用CCK-8試劑盒(Cell Counting Kit-8),測定復爾康注射液對人腫瘤細胞株增殖的抑制作用。(2)體內(nèi)抗腫瘤活性:①建立小鼠肝癌H22細胞實體瘤模型(S型)和腹水瘤模型(A型),小鼠尾靜脈注射給藥10天,以腫瘤生長的抑制率(抑瘤率)和生命延長率測試復爾康注射液對荷瘤

3、小鼠腫瘤生長的影響;②建立人肝癌SMMC-7721細胞裸鼠移植瘤模型,在接種后第15天,去除移植瘤未生長或移植瘤生長過緩、過速的裸小鼠,選擇體內(nèi)已形成瘤塊且瘤徑約≥50 mm3的裸鼠用于實驗。采用腹腔注射給藥,每周連續(xù)給藥5天后停藥2天,共給藥4周。每周測量瘤徑和體重3次,通過比較腫瘤體積、相對腫瘤體積和相對腫瘤增殖率的變化檢測復爾康注射液對荷瘤裸鼠腫瘤生長的抑制作用。(3)體外對血管生成的影響:采用CCK-8 assay、Woundi

4、ng healing assay和Tube formation assay等檢測復爾康注射液對人微血管內(nèi)皮細胞HMEC增殖、遷移和小管形成的影響。結(jié)果：(1)體外抗腫瘤活性:復爾康注射液能明顯抑制K562、SMMC-7721、BeL-7402細胞的增殖,隨著濃度的增加,抑制作用增強,呈現(xiàn)出良好的量效關系,其IC50分別為(31.75±1.50)、(61.51±1.58)和(68.39±7.16)μg/mL,活性較強,但對HCT116和K

5、B細胞的抑制作用較弱。(2)體內(nèi)抗腫瘤活性:①復爾康注射液6.25、12.5和25 mg×kg-1劑量組對小鼠肝癌H22實體瘤(S型)生長的抑制百分率(抑瘤率)分別為21.50％、39.10％、49.36％,與陰性對照組比較,差導有統(tǒng)計學意義(P<0.05),但同樣的劑量復爾康注射液對小鼠肝癌H22腹水瘤(A型)無明顯的抑制作用,不能顯著延長小鼠的生存時間;②復爾康注射液126、252、378 mg·kg-1治療組和陽性對照康康萊特注射

6、液均不同程度抑制裸鼠移植瘤的生長,腹腔注射給藥4周后,TV、RTV和[T/C(％)]明顯下降,低、中、高劑量組[T/C(％)]分別為57.75％、39.9％和44.08％,與陰性對照組比較, P<0.05。(3)體外對血管生成的影響:復爾康注射液明顯抑制人微血管內(nèi)皮細胞HMEC的增殖, IC50為11.44±3.97 mg·L-1;復爾康注射液在3.125 mg·L-1時即分別表現(xiàn)出抑制HMEC細胞遷移和小管形成的作用,且隨著濃度的增加

7、,抑制作用愈明顯,呈現(xiàn)出較好的劑量依賴關系。結(jié)論：復爾康注射液體外對白血病及肝癌細胞株作用明顯,但對其他實體瘤細胞作用差,對腫瘤細胞具有一定的選擇性。復爾康注射液體內(nèi)對小鼠肝癌H22實體瘤(S型)和人肝癌SMMC-7721細胞裸鼠移植瘤的腫瘤的生長具有明顯抑制作用,但同樣的劑量下不能延長H22腹水瘤(A型)小鼠的生存時間。復爾康注射液具有抗新生血管生成的作用,體外能明顯抑制HMEC的增殖、遷移和小管形成,結(jié)合其體內(nèi)抗腫瘤活性強,推測抗血