杏花雨注射液的體內(nèi)抗腫瘤作用及作用機制研究.pdf

1、杏花雨注射液是新研制的銀杏葉提取物注射液，提取物中黃酮苷含量為49.79％，萜烯為4.4％。已有許多文獻報道黃酮類化合物有較好的抗腫瘤活性，杏花雨注射液中含有豐富的黃酮類物質(zhì)，含量居各類物質(zhì)之首。因此，其在抗腫瘤方面可能具有很大潛力。本實驗旨在通過研究杏花雨注射液對肝癌(H<,22>)模型小鼠腫瘤生長的影響，并初步探討其作用機制，從而為其更好的應(yīng)用于臨床提供客觀而科學(xué)的依據(jù)。 目的：觀察杏花雨注射液對肝癌(H<,22>)模型小鼠

2、的抑瘤作用并對其作用機制進行研究。 方法：(1)抑瘤作用的研究：取生長7天的肝癌H<,22>腹水型小鼠頸椎脫臼處死，固定于蠟盤上，用無菌空針刺破腹腔，吸取乳白色腹水，用無菌生理鹽水稀釋，混合均勻制備瘤細胞懸液，調(diào)整腫瘤細胞濃度為1×10<'7>/ml備用。取昆明種小鼠50只，右前肢腋窩下常規(guī)消毒，每鼠皮下注射瘤細胞懸液0.2ml。按體重隨機分為模型對照組、杏花雨注射液17.5mg/kg、35mg/kg、70mg/kg劑量組，以及

3、環(huán)磷酰胺(20mg/kg)陽性對照組，每組10只小鼠。接種24h后開始給藥，腹腔注射每天一次，給藥容積為0.2ml/10g，連續(xù)7天，模型對照組給予同等容積的生理鹽水。于末次給藥后24h，頸椎脫臼處死小鼠，剝出瘤塊稱重，計算抑瘤率。(2)增效作用的研究：瘤細胞懸液的制備方法同前，取昆明種小鼠40只，右前肢腋窩下常規(guī)消毒，每鼠皮下注射瘤細胞懸液0.2ml。按體重隨機分為模型對照組、杏花雨注射液17.5mg/kg劑量組、環(huán)磷酰胺(5mg/k

4、g)組、合用組，每組10只小鼠。杏花雨注射液采用腹腔注射，環(huán)磷酰胺(5mg/kg)采用皮下注射，每天一次，給藥容積為0.2ml/10g，連續(xù)7天，模型對照組給予等量的生理鹽水。于末次給藥后24h，頸椎脫臼處死小鼠，剝出瘤塊稱重，計算抑瘤率。(3)作用機制研究：采用MTT比色法測定荷瘤小鼠脾臟NK細胞的活性， ELISA法檢測荷瘤小鼠血清中白細胞介素2(IL-2)及腫瘤壞死因子(WNF-a)的濃度，以及免疫組織化學(xué)法檢測瘤組織MVD及VE

5、GF水平的表達。 結(jié)果：(1)抑瘤作用：杏花雨注射液可以顯著的抑制荷瘤(H<,22>)模型小鼠腫瘤的生長，17.5mg/kg、35mg/kg、70mg/kg劑量組的抑瘤率分別為22.60％、48.84％、40.22％(P<0.01)，環(huán)磷酰胺的抑瘤率為57.12％(P<0.01)。 (2) 增效作用：杏花雨注射液17.5mg/kg劑量組、環(huán)磷酰胺(5mg/kg)組、以及合用組抑瘤率分別為18.07％、23.88％、34

6、.59％(P<0.01)，可見兩者合用的抑瘤作用好于兩者單用。 (3)對NK細胞活性的影響：杏花雨注射液可以顯著的提高荷瘤小鼠脾臟NK細胞的活性，模型對照組與杏花雨三個劑量組對腫瘤(H<,22>)細胞的殺傷率分別為：(43.58±6.95)％、(67.21±3.91)％、(75.06±4.70)％、(72.25±6.94)％，可見杏花雨注射液三個劑量組的殺傷率均高于模型對照組(P<0.01)。 (4)對荷瘤小鼠血清IL

7、-2和TNF-a濃度的影響：杏花雨注射液能夠顯著提高荷瘤小鼠血清中IL-2和TNF-a的濃度，模型對照組、杏花雨注射液三個劑量組及環(huán)磷酰胺(20mg/kg)組荷瘤小鼠血清中IL-2濃度分別為：34.23±4.55pg/ml、38.57±8.33pg/ml、42.34±7.41pg/ml、41.60±7.76pg/ml、25.35±7.70pg/ml，杏花雨注射液35mg/kg劑量組高于模型對照組(P<0.05)；以上各組TNF-a濃度分

8、別為：24.00±6.93pg/ml、30.77±6.07pg/ml、53.25±10.69pg/ml、51.61±9.10pg/ml、14.35±2.95pg/ml，杏花雨注射液35mg/kg、70mg/kg劑量組均高于模型對照組(P<0.01)，而環(huán)磷酰胺(20mg/kg)組荷瘤小鼠血清中IL-2和TBF-a濃度均低于模型對照組(P<0.05)。 (5) 對腫瘤組織微血管形成的影響：杏花雨注射液可以抑制腫瘤組織微血管的形成

9、，模型對照組、杏花雨注射液三個劑量組及環(huán)磷酰胺(20mg/kg)組的腫瘤組織微血管密度(MVD)分別為：35.48±5.36、30.40±2.43、22.72±2.18、29.74±3.53、18.78±1.73，血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)表達平均染色強度分別為：2.06±0.33、1.62±0.27、1.58±0.26、1.60±0.32、1.54±0.35，其中杏花雨注射液35mg/kg劑量組及環(huán)磷酰胺(20mg/kg)組與模型對