SDF-1、CXCR4在db-db小鼠腎臟組織中的表達及其對近端腎小管上皮細胞Ⅳ型膠原和纖維連接蛋白表達的影響.pdf

1、目的：探討基質(zhì)細胞衍生因子-1（stromal cell derived factor-1，SDF-1）與趨化因子受體CXCR4在2型糖尿病db/db小鼠腎臟中的表達及其對大鼠近端腎小管上皮細胞IV型膠原（type IV collagen）及纖維連接蛋白（fibronectin，F(xiàn)n）表達的影響。
　　 方法：
　　 1. 8周齡雄性db/db小鼠及其對照雄性C57BL/6小鼠，分為4組，對照組：C57BL/6小鼠，隨機

2、分為(1)對照組，5只，(2)對照Valsartan（纈沙坦）干預(yù)組；實驗組：db/db小鼠，隨機分為(1)實驗對照組，5只，(2)實驗Valsartan干預(yù)組，5只。Valsartan 灌胃，40 mg/kg/d。20周后處死動物，檢測空腹血糖（fasting plasma glucose，F(xiàn)PG）、24小時尿白蛋白及尿肌酐清除率（creatinine clearance rate，Ccr）；實時熒光定量PCR（real-time P

3、CR）及免疫組織化學(xué)方法檢測SDF-1、CXCR4、HIF-1α及F4/80在小鼠腎臟組織中的表達；
　　 2. 體外培養(yǎng)大鼠近端腎小管上皮細胞（NRK細胞），PCR方法檢測CXCR4受體的表達；
　　 3. 高濃度葡萄糖、SDF-1、Valsartan及轉(zhuǎn)化生長因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）干預(yù)NRK細胞，real-time PCR方法檢測SDF-1、CXCR4、

4、type IV collagen及Fn mRNA的表達；
　　 4. SDF-1及磷脂酰肌醇-3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase，PI3-kinase）特異性抑制劑LY294002干預(yù)NRK細胞，real-time PCR方法檢測TGF-β1的表達，Weatern blot方法檢測AKT及磷酸化AKT（phospho-AKT，p-AKT）蛋白的表達。
　　 結(jié)果：
　　 1. D

5、b/db小鼠FPG、24小時尿白蛋白明顯增加，Ccr明顯降低，Valsartan對小鼠血糖無明顯影響，但能顯著降低24小時尿白蛋白，提高Ccr；
　　 2. SDF-1、CXCR4及F4/80在db/db小鼠腎臟組織表達明顯增高。Valsartan能顯著降低SDF-1 mRNA的表達；降低CXCR4 mRNA的表達，但差異無顯著性；降低F4/80的表達。HIF-1αmRNA在db/db小鼠腎臟組織的表達無明顯升高；
　　

6、 3. 瓊脂糖凝膠電泳及免疫組織化學(xué)顯示腎小管上皮細胞表達CXCR4受體；
　　 4. 高濃度葡萄糖對NRK細胞CXCR4 mRNA的表達無顯著影響，但在干預(yù)3小時后能增強細胞SDF-1 mRNA的表達；
　　 5. TGF-β1增強NRK細胞 CXCR4 mRNA的表達，高峰時間在3小時；
　　 6. 高濃度葡萄糖干預(yù)NRK細胞24小時能增強細胞type IV collagen和Fn mRNA的表達；
　

7、　 7. TGF-β1在低糖和高糖環(huán)境中干預(yù)NRK細胞24小時能增強細胞type IV collagen和Fn mRNA的表達；
　　 8. Valsartan在低糖和高糖環(huán)境中干預(yù)NRK細胞24小時能降低細胞type IV collagen mRNA的表達，在高糖環(huán)境中能降低Fn mRNA的表達，但在低糖環(huán)境中不能顯著降低Fn mRNA的表達；
　　 9. SDF-1在低糖和高糖環(huán)境中干預(yù)NRK細胞24小時能降低細胞

8、type IV collagen及Fn mRNA的表達，Valsartan和SDF-1起協(xié)同作用；
　　 10. SDF-1在低糖和高糖環(huán)境中干預(yù)NRK細胞24小時能抑制TGF-β1升高type IV collagen和Fn mRNA表達的效應(yīng)，Valsartan和SDF-1起協(xié)同作用；
　　 11. SDF-1α在低糖和高糖環(huán)境中干預(yù)NRK細胞24小時能降低TGF-β1 mRNA的表達，LY294002能抑制SDF-1

9、α下調(diào)TGF-β1 mRNA表達的效應(yīng)；SDF-1α干預(yù)NRK細胞后，p-AKT蛋白表達增加，加入LY294002后抑制SDF-1α誘導(dǎo)的p-AKT蛋白表達的增加，LY294002單獨作用對細胞p-AKT蛋白的表達無明顯影響。
　　 結(jié)論：2型糖尿病db/db小鼠腎臟組織SDF-1、CXCR4表達增高，巨噬細胞浸潤增多，Valsartan能降低SDF-1、CXCR4的表達和巨噬細胞的浸潤，改善腎功能；腎小管上皮細胞表達CXCR4