溶菌酶再折疊與苯酚光催化氧化中間產(chǎn)物的研究.pdf

1、隨著基因工程技術(shù)的迅速發(fā)展,蛋白質(zhì)的異體表達(dá)成為生產(chǎn)生物醫(yī)藥和特殊化學(xué)品的新的高效途徑。E.coli是目前基因工程生產(chǎn)重組蛋白的主要載體,但是以大腸桿菌為宿主細(xì)胞的表達(dá)產(chǎn)物通常聚集成無生物活性的包涵體蛋白質(zhì)。為獲得具有活性的蛋白,首先需用變性劑將包涵體溶解,但同時(shí)也破壞了蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu),因此需要對變性劑溶解的蛋白質(zhì)進(jìn)行再折疊才能得到構(gòu)象正確、有生物學(xué)活性的重組蛋白。目前,蛋白質(zhì)再折疊已成為現(xiàn)代生物工程下游操作中的一個(gè)新“單元操作”。但

2、自然界中的蛋白質(zhì)再折疊問題仍是蛋白質(zhì)化學(xué)基礎(chǔ)科學(xué)的一個(gè)挑戰(zhàn)。
　　 本文將以溶菌酶為模型蛋白,主要基于溶菌酶再折疊、去折疊的新方法兩方面,開展以下研究工作:
　　 1、利用鹽酸胍變性溶菌酶,用紫外分光光度計(jì)及微生物技術(shù)監(jiān)測尿素與鹽酸胍對變性溶菌酶復(fù)性的協(xié)同作用。并利用對鹽酸胍與尿素對溶菌酶復(fù)性過程的折疊動力學(xué)行為,及動力學(xué)常數(shù)的影響作了相應(yīng)的討論。
　　 2、利用尿素展開溶菌酶,用熒光相圖法監(jiān)測不同溫度下不同尿素

3、濃度對溶菌酶去折疊中間體的影響,并對4℃下溶菌酶的去折疊動力學(xué)過程進(jìn)行討論。結(jié)果表明,溫度及尿素濃度對溶菌酶去折疊中間體有很大的影響。溶菌酶去折疊過程符合三態(tài)模型,但由于溫度與尿素濃度的差異,使溶菌酶去折疊中間體變化過快無法被監(jiān)測到,而使有些過程看似符合二態(tài)模型。
　　 3、應(yīng)用陰離子表面活性劑十二烷基苯磺酸鈉變性溶菌酶和陽離子表面活性劑十六烷基三甲基溴化銨復(fù)性溶菌酶。利用串聯(lián)式壓電石英晶體傳感器對電導(dǎo)的敏感響應(yīng)的特性來監(jiān)測這一

4、系列過程。并對天然態(tài)、變性態(tài)及復(fù)性態(tài)三種溶菌酶的熒光發(fā)射譜圖做了比較與討論。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,串聯(lián)式石英晶體傳感器能夠作為一種新型、簡單的監(jiān)測手段來較好的監(jiān)測表面活性劑對溶菌酶的變性、復(fù)性過程。
　　 4、以365 nm處的紫外光為催化劑、過氧化氫為氧化劑催化氧化苯酚,使用高效液相色譜對苯酚及其中間產(chǎn)物檢測并定量。通過改變氧化劑投加量,討論其對中間產(chǎn)物的影響,并對苯酚的過氧化氫催化氧化動力學(xué)過程進(jìn)行了分析與討論。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,該催化