重組鼠IL-12腺病毒轉(zhuǎn)染KC對(duì)SMMC-7721人肝癌細(xì)胞的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、蘇州大學(xué)碩士學(xué)位論文重組鼠IL12腺病毒轉(zhuǎn)染KC對(duì)SMMC7721人肝癌細(xì)胞的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究姓名：李志民申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：外科學(xué)（普外）指導(dǎo)教師：吳浩榮20080401重組鼠IL12腺病毒轉(zhuǎn)染KC對(duì)SMMC7721人肝癌細(xì)胞的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究中文摘要疫組化，檢測(cè)VEGFmRNA的表達(dá)及PCNA、Bcl2、CD34陽(yáng)性率，觀察腫瘤細(xì)胞增殖情況及微血管密度(MVD)。結(jié)果：(1)每只SD大鼠可得到10““15x107個(gè)KC，細(xì)胞的存活率

2、在93％以上；ED2單抗染色鑒定KC純度可達(dá)95％。(2)重組腺病毒AdvmlL12和AdvEGFP經(jīng)擴(kuò)增后效價(jià)分別約2O109pfu／ml和30x109pfu／ml；AdvmlL1250MOI轉(zhuǎn)染KC，24hELISA檢測(cè)上清液中IL12濃度為56429a：3124pg／ml，是對(duì)照組的10倍左右，并隨時(shí)間延長(zhǎng)繼續(xù)升高；取相同滴度AdvEGFP50MOI轉(zhuǎn)染KC，24h熒光觀察轉(zhuǎn)染率達(dá)90％；MTT提示：效靶比5：l時(shí)，第4d實(shí)驗(yàn)組(

3、KCAdVmlL12SMMC7721)肝癌細(xì)胞抑制率為5012％，而對(duì)照組(KCSMMC7721)僅為25％，兩者有顯著性差異；ELISA檢測(cè)：VEGF的表達(dá)量在實(shí)驗(yàn)組呈下降趨勢(shì)，并●與時(shí)間呈負(fù)相關(guān)，與對(duì)照組比較差別明顯；FCM檢測(cè)：48h時(shí)，KCAdvmlL12上清組中SMMC7721人肝癌細(xì)胞組凋亡率達(dá)122％，較對(duì)照組明顯增加。(3)裸鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組(KCAdvmlL12)瘤體體積161841111113，對(duì)照組(NS)體積

4、63775mm3，兩者比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；實(shí)驗(yàn)組脾臟指數(shù)及外周血免疫細(xì)胞數(shù)等較對(duì)照組均有所增加；腫瘤組織切片HE染色提示實(shí)驗(yàn)組腫瘤細(xì)胞異型性減少、瘤組織中有明顯的淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)；對(duì)其腫瘤組織行RTPCR發(fā)現(xiàn)，VEGFmRNA在實(shí)驗(yàn)組中的表達(dá)較對(duì)照組下調(diào)；腫瘤組織免疫組化提示：實(shí)驗(yàn)組PCNA、Bcl2陽(yáng)性細(xì)胞比率較對(duì)照組明顯減少、CD34染色標(biāo)記測(cè)定MVD較對(duì)照組相比也呈下降趨勢(shì)。結(jié)論：(1)采用Ⅳ型膠原酶、鏈霉蛋白酶E離體灌注消化，Nyco

5、denz密度梯度離心及選擇性貼壁法能夠得到一定數(shù)量級(jí)別的KC，其純度和活性能滿足進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)要求。(2)AdvmlL12在體外能有效地轉(zhuǎn)染KC和表達(dá)IL12；KCAdvmlL12和SMMC7721人肝癌細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)能提高對(duì)肝癌細(xì)胞的抑制率、加速腫瘤細(xì)胞調(diào)亡。(3)瘤內(nèi)、瘤周注射KC。AdvmlL12能有效的抑制裸鼠肝癌移植瘤的發(fā)展、阻止瘤體微轉(zhuǎn)移，并能提高機(jī)體免疫力。關(guān)鍵詞：重組腺病毒，白細(xì)胞介素12，KC，SMMC7721作者：李志民指