雌二醇對(duì)宮腔粘連患者子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞MMP-9表達(dá)的影響.pdf

1、宮腔粘連(intrauterine adhesions，IUA)即由于各種原因?qū)е伦訉m內(nèi)膜纖維化及疤痕化、不同程度缺失、內(nèi)膜變薄、增生及分泌不足、子宮前后壁粘連、宮腔容積縮小。人流、藥流，尤其術(shù)后并發(fā)炎癥是宮腔粘連的主要原因，隨著年輕女性人流、藥流等宮腔操作增多，宮腔粘連已成為臨床常見病之一。宮腔粘連是不孕、流產(chǎn)、早產(chǎn)的主要原因。宮腔粘連治愈率低下，手術(shù)切開后粘連易復(fù)發(fā)、妊娠率低，因此宮腔粘連的治療是臨床工作的一大難題。部分原因在于目前

2、對(duì)IUA的研究大多數(shù)僅局限在它的診斷和治療方面，對(duì)其形成機(jī)制和病理生理變化缺乏了解，國內(nèi)外也缺乏相關(guān)研究資料。 國內(nèi)研究報(bào)道宮腔粘連患者子宮內(nèi)膜上皮的基質(zhì)金屬蛋白酶—9(matrix metalloproteinase—9，MMP—9)表達(dá)強(qiáng)度明顯低于非宮腔粘連患者，MMP—9的低表達(dá)可使蛋白水解活性降低，破壞了纖維蛋白溶解和合成的平衡，導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的沉積，子宮內(nèi)膜逐漸被結(jié)締組織取代，最終導(dǎo)致子宮內(nèi)膜纖維化，IUA形

3、成。 目的：本課題擬通過觀察離體宮腔粘連患者子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞雌激素干擾后MMP—9的表達(dá)，探討宮腔粘連子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞對(duì)雌激素的反應(yīng)與非宮腔粘連子宮內(nèi)膜有何不同，為進(jìn)一步探索宮腔粘連的發(fā)病機(jī)制、療效欠佳的原因和如何促進(jìn)患者子宮內(nèi)膜生長厚度、改善宮腔環(huán)境、胚胎著床條件和提高妊娠率提供部分實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。 材料與方法: 1.細(xì)胞培養(yǎng) 選擇2008年4月到12月在中山二院婦產(chǎn)科因?qū)m腔疾病行宮腔鏡檢查或手術(shù)的宮腔粘連

4、患者15名，非宮腔粘連患者20名，年齡20～40歲。術(shù)前3個(gè)月未用激素，無子宮內(nèi)膜原發(fā)或繼發(fā)惡性病變，無高血壓、糖尿病、全身結(jié)締組織病變等。術(shù)中獲取子宮內(nèi)膜，低溫條件下立即轉(zhuǎn)移到實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行分離培養(yǎng)，采取酶消化、機(jī)械過濾、選擇性貼壁等方法分離子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞和子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞，并對(duì)子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)。 2.子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞HE染色 HE染色觀察細(xì)胞形態(tài)。 3.子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞純度鑒定 采用波形蛋

5、白抗體進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)法鑒定細(xì)胞純度。 4.MTT法繪制生長曲線 MTT法得出以時(shí)間相對(duì)吸光度變化的曲線反映細(xì)胞增殖的速度，描繪細(xì)胞生長曲線，觀察細(xì)胞生長周期。 5.雌二醇對(duì)子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞生長周期的影響 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期，觀察E2對(duì)宮腔粘連子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞(觀察組)及非宮腔粘連患者子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞(對(duì)照組)增殖和凋亡的影響。 6.雌二醇對(duì)子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞MMP—9表達(dá)的影響 ELI

6、SA法測(cè)定宮腔粘連患者子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞和宮腔粘連患者子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞在雌激素刺激前后MMP—9的表達(dá)。 結(jié)果: 1.子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)情況： 分離后的原代子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞細(xì)胞活性高，可有限傳代10-20代。 2.子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞HE染色觀察細(xì)胞形態(tài)： 染色后觀察子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞呈梭形或三角形，細(xì)胞輪廓清晰，胞質(zhì)豐富，核明顯，可見核仁。 3.細(xì)胞純度鑒定結(jié)果： 分離保留細(xì)胞免疫組化

7、結(jié)果顯示，波形蛋白陽性，且陽性率較高，達(dá)(98.75±1.30)％。 4.細(xì)胞生長曲線 細(xì)胞初期成對(duì)數(shù)生長，8-10天達(dá)平臺(tái)，12天之后開始調(diào)亡。 5.雌二醇對(duì)子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞生長周期的影響 雌二醇作用24小時(shí)后，兩組增殖指數(shù)均增高，觀察組增高幅度低于對(duì)照組；觀察組凋亡指數(shù)觀察組升高，對(duì)照組降低；觀察組S期細(xì)胞百分比無明顯變化，對(duì)照組升高。 6.雌二醇對(duì)子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞MMP—9表達(dá)的影響

8、 雌二醇作用24h后與基礎(chǔ)狀態(tài)相比，觀察組和對(duì)照組表達(dá)量均有所升高，但觀察組低于對(duì)照組，且升高的幅度亦低于對(duì)照組；對(duì)照組分泌期MMP—9表達(dá)高于增殖期；觀察組輕度患者M(jìn)MP—9表達(dá)較中度患者高。 結(jié)論: 1.雌二醇對(duì)宮腔粘連患者子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞增殖作用弱于對(duì)非宮腔粘連者，同時(shí)促進(jìn)其凋亡，對(duì)S期百分比沒有影響，推測(cè)宮腔粘連患者子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞增殖調(diào)控機(jī)制與非宮腔粘連者有所不同，子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞對(duì)雌二醇的反應(yīng)低下可能是宮腔粘