大規(guī)模生產(chǎn)冰核蛋白制品及冰核活性基因的擴(kuò)增研究.pdf

1、研究的意義：由于冰核細(xì)菌在許多方面都有著廣闊的應(yīng)用前景，因此大規(guī)模生產(chǎn)冰核活性蛋白，擴(kuò)增冰核活性基因，用于含冰核基因檢測(cè)，能夠具有很好的經(jīng)濟(jì)前景和社會(huì)效益。 研究的方法：(1)使用發(fā)酵法依次在搖瓶水平、5L罐及30L罐水平上，對(duì)完善培養(yǎng)基配方，提高冰核活性細(xì)菌生物量進(jìn)行了研究，并且使用機(jī)械破碎和化學(xué)抽提的方法實(shí)現(xiàn)較大量的提取冰核活性蛋白。(2)使用PCR擴(kuò)增技術(shù)對(duì)冰核細(xì)菌冰核活性基因的體外擴(kuò)增體系和擴(kuò)增條件進(jìn)行了初步的研究。

2、 本論文分別使用XanthomonasampelinaTS206和Erwiniaherbicola(A25)作為實(shí)驗(yàn)用菌種，主要研究?jī)?nèi)容有以下幾個(gè)方面：(1)在搖瓶水平的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)速是獲得較高生物量和較低副產(chǎn)品黃原膠的關(guān)鍵因素，對(duì)于細(xì)菌生物量來(lái)說(shuō)，影響程度大小的順序依次為轉(zhuǎn)速＞裝液量＞培養(yǎng)基的糖濃度。對(duì)細(xì)菌的產(chǎn)黃原膠量來(lái)說(shuō)，影響程度大小的順序依次為轉(zhuǎn)速＞培養(yǎng)基的糖濃度＞裝液量。在調(diào)整后的培養(yǎng)基條件下，菌體發(fā)酵粘度有大幅度下降，且產(chǎn)

3、黃原膠能力不強(qiáng)，雖然發(fā)酵結(jié)束后，菌體生物量有所下降，但膠量/菌量的值較大幅下降，且降低了發(fā)酵液處理的難度。(2)采用超聲波破碎和TritonX-100抽提相結(jié)合，建立了適合大規(guī)模提取XanthomonasampelinaTS206中冰核活性蛋白的實(shí)驗(yàn)路線。經(jīng)過(guò)該實(shí)驗(yàn)可以得到，每10克當(dāng)天得到的新鮮菌體，可以抽提所能得的冰核蛋白制品濕重約為1.2克，即得率為12％左右。(3)建立了本實(shí)驗(yàn)室提取Erwiniaherbicola(A25)細(xì)菌