ALA光動力診斷與光動力治療惡性腦腫瘤的療效及機(jī)制研究.pdf

1、第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文ALA光動力診斷與光動力治療惡性腦腫瘤的療效及機(jī)制研究姓名：肖虹申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：外科學(xué)（神經(jīng)外）指導(dǎo)教師：馮華20090501第二軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文并且合理協(xié)調(diào)利用自噬與凋亡抗腫瘤的積極因素，調(diào)動腫瘤細(xì)胞自身死亡機(jī)制，將有助于推動腫瘤光動力治療研究及其相關(guān)學(xué)科的共同發(fā)展。為了探討ALA光動力診斷與光動力治療腦腫瘤的療效及機(jī)制，我們首先制備了兔腦VX2轉(zhuǎn)移瘤模型，分別給予PDD導(dǎo)向顯微手術(shù)和(或)PDT后

2、觀察實驗動物的生存期、MRI影像及病理學(xué)表現(xiàn)，探討光敏劑ALA應(yīng)用于兔腦VX2轉(zhuǎn)移瘤的診斷及治療效果；然后體外建立大鼠C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞模型，觀察不同ALA濃度及不同孵育時間PDT對C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞存活率的影響，應(yīng)用TUNEL法測定細(xì)胞凋亡率，并通過MDC染色和電鏡等觀察ALAPDT后的自噬現(xiàn)象，探討自噬與凋亡機(jī)制在ALA。PDT誘導(dǎo)C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞死亡中的作用；最后，我們分別使用自噬抑制劑3MA和凋亡抑制劑zVAD—fmk干預(yù)后，觀察ALAP

3、DT誘導(dǎo)C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞存活率的變化，并檢測溶酶體酶cathepsinB蛋白表達(dá)和Caspase一3活化，以探討自噬與凋亡機(jī)制在ALAPDT誘導(dǎo)C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞死亡中的作用機(jī)制。主要實驗結(jié)果如下：1各實驗組(普通光源顯微手術(shù)組、PDT組、PDD組、PDD導(dǎo)向顯微手術(shù)PDT組)平均生存期均較荷瘤對照組明顯延長(PO01)，而PDD導(dǎo)向顯微手術(shù)PDT組荷瘤兔生存期顯著長于PDD組(尸O05)。MRI結(jié)果顯示PDD導(dǎo)向顯微手術(shù)、PDD導(dǎo)向顯微手術(shù)

4、PDT組較普通光源顯微手術(shù)組能更徹底切除腫瘤。組織學(xué)檢查結(jié)果顯示腫瘤熒光強(qiáng)度較高的區(qū)域腫瘤細(xì)胞多；熒光微弱的區(qū)域散在分布有少許腫瘤細(xì)胞，其核分裂像及細(xì)胞密度明顯降低或接近正常組織，少見異常的血管內(nèi)皮增生。腫瘤周邊區(qū)域未見腫瘤細(xì)胞；壞死的腫瘤區(qū)域沒有激發(fā)熒光。尸檢病理檢查提示各手術(shù)治療組腫瘤在原術(shù)腔不同程度的復(fù)發(fā)，復(fù)發(fā)率分別為：普通光源顯微手術(shù)組50％(5／10例)，PDD組25％(5／20例)；PDDPDT組15％(3／20例)。2經(jīng)5

5、ALA介導(dǎo)的光動力治療后，C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞的存活率隨5ALA的濃度遞增逐漸下降，各組之間及各實驗組與對照組間均有顯著差異，當(dāng)濃度為400ug／ml時細(xì)胞存活率少于50％。不同5一ALA孵育時間的細(xì)胞存活率存在顯著差異，5一ALA孵育時間為6h之前，細(xì)胞存活率隨著孵育時間的延長而下降；超過6h后細(xì)胞存活率無顯著變化。TUNEL法測定100tg／ml、200Itg／ml及400pg／ml5ALA組C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡率分別為2l％、49％、62