HMME介導(dǎo)的光動(dòng)力療法治療骨與軟組織肉瘤的療效及機(jī)理研究.pdf

1、目的：探討血卟啉單甲醚介導(dǎo)光動(dòng)力療法(HMME-PDT)的抗肉瘤效應(yīng)及其機(jī)理。
　　方法：體外實(shí)驗(yàn)中，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)骨肉瘤細(xì)胞(LM8)和成肌細(xì)胞(C2C12)在不同孵育時(shí)間及不同濃度HMME作用下胞內(nèi)光敏劑的攝取量;MTT法檢測(cè)HMME的在LM8細(xì)胞中的最佳孵育時(shí)間及對(duì)多株肉瘤細(xì)胞存活率的影響，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)骨肉瘤細(xì)胞凋亡率，Hoechst33342染色法觀察細(xì)胞凋亡;實(shí)時(shí)熒光定量PCR(QRT-PCT)檢測(cè)caspase-3、

2、Bcl-x、 p53和RelA mRNA相對(duì)表達(dá)量;蛋白免疫印跡(Western blotting)檢測(cè)腫瘤細(xì)胞中caspase-1、-3、-6、-9、PARP、Bcl-x、p53及RelA蛋白相對(duì)表達(dá)量;不可逆caspase通路抑制劑(Z-VAD-FMK)及壞死抑制劑(Nec-1)檢測(cè)PDT介導(dǎo)的細(xì)胞死亡形式。體外實(shí)驗(yàn)中，建立小鼠骨肉瘤模型，測(cè)定瘤體體積及瘤重評(píng)估PDT的抗腫瘤效應(yīng);hematoxylin-eosin(HE)染色檢測(cè)腫

3、瘤組織形態(tài)學(xué)改變;免疫組化法（Immunohistochemistry，IHC）caspase-1、-3、-6、-9和PARP在腫瘤組織中的表達(dá)。
　　結(jié)果：光敏劑HMME選擇性的聚集于骨肉瘤細(xì)胞中，而正常細(xì)胞攝取較少，且在骨肉瘤細(xì)胞中的攝取呈現(xiàn)孵育時(shí)間及濃度依賴性。HMME在肉瘤細(xì)胞內(nèi)的最佳孵育時(shí)間為4小時(shí)，HMME-PDT能顯著殺傷骨與軟組織肉瘤細(xì)胞，且殺傷效應(yīng)隨著HMME濃度及能量密度的增高而增強(qiáng)。HMME-PDT可顯著誘導(dǎo)

4、貼壁及懸浮培養(yǎng)骨肉瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡。Hoechst33342染色觀察到典型的凋亡改變（核固縮、細(xì)胞變圓等）。QRT-PCT及Western blotting結(jié)果顯示:HMME-PDT可顯著上調(diào)caspase-3mRNA和蛋白相對(duì)表達(dá)量，而HMME-PDT可明顯下調(diào)Bcl-x、p53、RelA mRNA和蛋白相對(duì)表達(dá)量;凋亡是HMME-PDT介導(dǎo)的細(xì)胞死亡的主要形式，且與caspase依賴的凋亡通路密切相關(guān)。HMME-PDT組腫瘤體積及瘤重

5、均較空白組相比顯著減小;腫瘤區(qū)域出現(xiàn)廣泛壞死;HMME-PDT組小鼠腫瘤組織caspase-1、-3、-6、-9、PARP蛋白表達(dá)量顯著上調(diào)。
　　結(jié)論：HMME選擇性的聚集于骨與軟組織肉瘤細(xì)胞中，而正常細(xì)胞攝取較少;HMME-PDT對(duì)肉瘤細(xì)胞有顯著的殺傷效應(yīng)，且隨著HMME濃度及能量密度的增高而增強(qiáng);HMME-PDT誘導(dǎo)肉瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡是其重要的殺傷機(jī)制;HMME-PDT能有效的抑制肉瘤的生長(zhǎng)，其抗肉瘤效應(yīng)與caspase依賴的