2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、光動(dòng)力療法(Photodynamic therapy,PDT)是一種治療惡性腫瘤和某些良性增生性疾病的新方法。光動(dòng)力療法在對(duì)腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生直接的殺傷作用同時(shí),還可以增強(qiáng)宿主的抗腫瘤免疫反應(yīng)。目前已有研究建立了光動(dòng)力療法制備腫瘤疫苗的方法,但對(duì)于光動(dòng)力療法制備肝癌疫苗的研究并不多見。本研究以鼠肝癌細(xì)胞MM45T-Li為研究模型,探討利用光動(dòng)力療法制備肝癌疫苗的抗瘤效應(yīng),為肝癌的免疫治療提供一種新的途徑。
  目的:
  1.探討

2、光動(dòng)力療法在體外對(duì)鼠肝癌細(xì)胞MM45T-Li的殺傷作用特點(diǎn),以尋找光動(dòng)力療法制備疫苗的作用參數(shù)。
  2.分析光動(dòng)力療法制備的腫瘤疫苗對(duì)小鼠肝癌移植瘤的體內(nèi)預(yù)防保護(hù)和治療作用,比較不同光照劑量對(duì)PDT制備細(xì)胞疫苗的影響。
  3.探討光動(dòng)力療法制備腫瘤細(xì)胞疫苗對(duì)小鼠體內(nèi)抗腫瘤免疫反應(yīng)的影響。
  方法:
  1.利用熒光顯微鏡觀察不同濃度HMME在MM45T-Li細(xì)胞中的吸收;多功能酶標(biāo)儀定量分析細(xì)胞內(nèi)HMME在

3、不同時(shí)間點(diǎn)的熒光強(qiáng)度;共聚焦顯微鏡觀察HMME在MM45T-Li細(xì)胞中的亞細(xì)胞定位;在以HMME為光敏劑,630nm激光為光源的PDT作用于細(xì)胞,MTT法檢測(cè)光動(dòng)力療法對(duì)細(xì)胞的殺傷效應(yīng)。Hoechst細(xì)胞核熒光染色法觀察光動(dòng)力療法對(duì)細(xì)胞核形態(tài)的改變。AnnexinV-FITC/PI雙染結(jié)合流式細(xì)胞儀檢測(cè)光動(dòng)力療法檢測(cè)光動(dòng)力療法誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。
  2.在功率密度為1.5mw/cm2的條件下,利用不同能量密度的光動(dòng)力療法作用細(xì)胞24

4、h后提取細(xì)胞裂解液作為腫瘤疫苗。以生理鹽水作為對(duì)照,反復(fù)凍融法制備的疫苗為陽(yáng)性對(duì)照。疫苗免疫小鼠后建立小鼠肝癌模型,觀察腫瘤體積變化。腫瘤生長(zhǎng)至第16天,處死小鼠,稱量腫瘤重量,HE染色觀察腫瘤病理組織學(xué)變化。
  3.免疫接種結(jié)束后7d,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血T細(xì)胞亞群的變化。同時(shí)利用階梯密度離心法提取脾淋巴細(xì)胞,MTT法檢測(cè)體外淋巴細(xì)胞毒性。
  4.檢測(cè)疫苗的治療作用:建立小鼠肝癌模型,疫苗免疫荷瘤小鼠,觀察腫瘤體積變化

5、。觀察周期為60天,計(jì)錄荷瘤小鼠生存期。
  結(jié)果:
  1.細(xì)胞內(nèi)HMME含量隨著光敏劑濃度及孵育時(shí)間的增加而增加。選擇4h孵育時(shí)間及濃度為20μg/ml的HMME作為PDT的最佳參數(shù)。共聚焦熒光顯微鏡顯示HMME分布在細(xì)胞核外,定位于線粒體。MTT檢測(cè)結(jié)果顯示PDT對(duì)細(xì)胞的殺傷率隨著光敏劑濃度和能量密度的增加而增加。當(dāng)HMME濃度為20μg/ml,光照劑量為2.7 J/cm2時(shí),PDT對(duì)細(xì)胞的殺傷率30.21%;光照劑量

6、為7.2J/cm2時(shí),殺傷率達(dá)90.65%。Hoechst染色觀察PDT作用24h后部分細(xì)胞出現(xiàn)染色質(zhì)凝集、核固縮、核碎裂等形態(tài)學(xué)改變。AnnexinV/PI流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示在能量密度為0.9至4.5J/cm2時(shí),PDT誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡隨著能量密度的增加而增加,最到達(dá)30.5±4.2%;當(dāng)能量密度增加至7.2J/cm2時(shí),細(xì)胞以壞死為主,凋亡率下降為4.1±2.7%。
  2.依據(jù)PDT的殺傷效果,選擇能量密度為2.7和7.2

7、J/cm2的光照劑量制備疫苗。在疫苗對(duì)荷瘤小鼠的預(yù)防保護(hù)實(shí)驗(yàn)中,與對(duì)照組相比,2.7J/cm2PDT組疫苗的腫瘤生長(zhǎng)緩慢,腫瘤的體積及重量明顯降低。對(duì)腫瘤體積的抑制率最高為59.8%。而大劑量7.2J/cm2PDT組中的腫瘤體積重量下降不明顯。各組腫瘤的病理組織表現(xiàn)無(wú)明顯差異。
  3.與對(duì)照組比較,2.7J/cm2 PDT及7.2J/cm2PDT組疫苗可以明顯改善機(jī)體免疫系統(tǒng)功能狀態(tài),逆轉(zhuǎn)外周血T細(xì)胞亞群CD4+/CD8+的比值

8、,增加NK細(xì)胞比例,同時(shí)增加脾淋巴細(xì)胞特異性細(xì)胞毒性。
  4.在疫苗對(duì)荷瘤小鼠的治療實(shí)驗(yàn)中,2.7J/cm2 PDT組疫苗的腫瘤生長(zhǎng)緩慢,甚至消退,明顯抑制荷瘤小鼠腫瘤的生長(zhǎng),并提高荷瘤小鼠生存率。
  結(jié)論:
  1.HMME介導(dǎo)的光動(dòng)力療法可以有效殺傷鼠肝癌細(xì)胞MM45T-Li,誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡與光照劑量密切相關(guān)。
  2.光動(dòng)力療法制備的肝癌細(xì)胞疫苗明顯抑制荷瘤小鼠腫瘤的生長(zhǎng),具有預(yù)防保護(hù)和治療作用。小劑量

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