版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、[目的]觀察在體外共培養(yǎng)并且接受980nm近紅外線照射后,上轉(zhuǎn)換納米顆粒(UCNPs-PEG-M540)對幼年Sprague Dawley(SD)大鼠脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞的殺傷作用。探討UCNPs介導(dǎo)的光動力療法在促進大鼠脊髓損傷后減少損傷區(qū)膠質(zhì)瘢痕的形成和行為功能恢復(fù)方面所起的作用。
[方法]采用溶劑熱法合成具有核殼結(jié)構(gòu)的上轉(zhuǎn)換納米顆粒(NaYF4∶Yb3+,Er3+/NaYF4,UCNPs),并用鍵聯(lián)的方法在顆粒表面包裹聚乙二
2、醇(Polyethylene glycol,PEG)和部花青M540(Merocyanine540)。顆粒(NaYF4∶Yb3+,Er3+/NaYF4-PEG-M540,UCNPs-PEG-M540)在體外被波長980nm的近紅外線激光照射后,用二苯基異苯并呋喃(Diphenylisobenzo furan,DPBF)檢測是否有單線態(tài)氧(singletoxygen,1O2)的產(chǎn)生。取實驗用幼年SD鼠2只,麻醉后取出脊髓組織并剪碎,置入裝
3、有細(xì)胞培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),采用差速黏附和恒溫?fù)u床震搖法對細(xì)胞進行純化。細(xì)胞在體外增殖,傳代后,對其用GFAP免疫組化染色進行鑒定,并觀察生長狀況。傳至第2代后,將星形膠質(zhì)細(xì)胞收集并與顆粒共培養(yǎng)24小時,用波長980nm的近紅外線激光照射后,MTT觀察細(xì)胞存活情況。并用電鏡觀察細(xì)胞器結(jié)構(gòu)的變化。與此同時,用NYU Impactor-Ⅱ打擊器制作Sprague Dawley大鼠胸10脊髓損傷模型(打擊重量和高度為:10g×50mm)。將8
4、0只脊髓損傷大鼠隨機分成4組:DMEM移植組;M540移植組;UCNPs-PEG移植組;UCNPs-PEG-M540移植組。大鼠脊髓損傷1周后,將上述4種移植物分別移植到4組大鼠脊髓損傷區(qū)周圍。術(shù)后采用BBB評分對大鼠的行為功能恢復(fù)情況進行評價。12周后,從每組隨機選取8只大鼠進行10%BDA順行示蹤標(biāo)記。標(biāo)記兩周后處死動物,將損傷段脊髓取出作5μm快速冰凍切片后,進行BDA顯影,GFAP和NF200免疫組化染色。Western blo
5、t定量分析GFAP在脊髓損傷區(qū)的表達。圖片用image pro plus5.0和ImageJ軟件處理,根據(jù)陽性反應(yīng)的積分光密度值(IOD)進行組間比較。
[結(jié)果]透射電子顯微鏡(TEM)顯示制備出的顆粒裸核NaYF4∶Yb3+,Er3+基本呈六角狀,且粒徑比較均勻,通過粒度分析儀檢測,結(jié)果顯示顆粒直徑在28nm左右。包殼后納米顆粒的形狀仍為六角狀,納米晶的平均尺寸為43nm。X-射線衍射(XRD)分析顯示,包殼后納米顆粒的衍射
6、圖譜與包殼前幾乎一致。裸核及核殼結(jié)構(gòu)納米顆粒XRD圖均與標(biāo)準(zhǔn)的六角相納米顆粒NaYF4的衍射譜衍射峰的峰位吻合的很好,這說明本實驗所制備出來的裸核顆粒及核殼結(jié)構(gòu)納米顆粒均是純的六角相的納米顆粒。傅立葉紅外光譜證明在顆粒NaYF4∶Yb3+,Er3+/NaYF4的表面成功的包覆上了PEG。能量色散X射線光譜分析(Energy Dispersive X-Ray spectrometry,EDX)證明M540被成功的連接到顆粒表面。DPBF在
7、410nm處的吸光度明顯減低,說明經(jīng)近紅外線激發(fā)后,UCNPs-PEG-M540使周圍的溶液中產(chǎn)生了單態(tài)氧。從幼鼠脊髓分離的星形膠質(zhì)細(xì)胞,經(jīng)純化后可以在體外穩(wěn)定的傳4代以上,純度為94.78%,形態(tài)類似成纖維細(xì)胞,GFAP染色呈陽性,細(xì)胞倍增時間約為2-3天。細(xì)胞與顆粒共培養(yǎng),并經(jīng)980nm近紅外光照射后,MTT顯示細(xì)胞存活率明顯下降。電鏡觀察顯示顆粒被細(xì)胞攝取,細(xì)胞膜皺縮,細(xì)胞核發(fā)生碎裂、溶解現(xiàn)象,線粒體溶解,核漿比例失調(diào)。細(xì)胞呈現(xiàn)凋
8、亡或者壞死表現(xiàn)。將4種移植物分別移植到大鼠脊髓損傷區(qū)周圍后4周開始,UCNPs-PEG-M540移植組動物的BBB評分顯著高于其余3組(p<0.05)。BDA順行示蹤標(biāo)記顯示UCNPs-PEG-M540移植組較其余三組有較多的再生神經(jīng)纖維通過損傷區(qū)。在橫斷面上,UCNPs-PEG-M540移植組陽性反應(yīng)區(qū)域的IOD值顯著高于其余三組(p<0.05)。NF200染色結(jié)果表明,UCNPs-PEG-M540移植組陽性反應(yīng)面積的IOD值顯著高于
9、其余三組(p<0.05)。而GFAP染色結(jié)果表明,UCNPs-PEG-M540移植組陽性反應(yīng)面積的IOD值顯著低于其余三組(p<0.05)。Western Blot結(jié)果顯示,GFAP的灰度值在UCNP-PEG-M540移植組的脊髓損傷區(qū)周圍最少(F值=2.17,P<0.01),說明膠質(zhì)瘢痕的形成在UCNP-PEG-M540移植組最少。
[結(jié)論]在980nm近紅外光的激發(fā)下,上轉(zhuǎn)換納米顆粒UCNPs-PEG-M540可以有效的殺
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 上轉(zhuǎn)換納米介導(dǎo)的光動力療法體外殺傷脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞的實驗研究.pdf
- 應(yīng)用納米技術(shù)構(gòu)建生物支架修復(fù)脊髓損傷的實驗研究.pdf
- 稀土摻雜NaYF4納米晶的上轉(zhuǎn)換光動力療法相關(guān)科學(xué)問題研究.pdf
- 干擾RhoA表達修復(fù)脊髓損傷的實驗研究.pdf
- 慢病毒載體介導(dǎo)siRNA沉默PTEN基因促進脊髓損傷修復(fù)的實驗研究.pdf
- 上轉(zhuǎn)換納米顆粒的制備及在光動力學(xué)治療、生物檢測中的應(yīng)用.pdf
- 基因沉默NMⅡ修復(fù)大鼠脊髓損傷的實驗研究.pdf
- Nafamostat聯(lián)合甲強龍修復(fù)脊髓損傷的實驗研究.pdf
- 內(nèi)皮祖細(xì)胞修復(fù)慢性脊髓損傷的實驗研究.pdf
- 上轉(zhuǎn)換-鈀基多功能納米顆粒的合成及在光動力-光熱治療方面的應(yīng)用.pdf
- 納米化Photosan光動力療法治療膽囊癌的實驗研究.pdf
- 光動力療法中光動力劑量的研究.pdf
- PSD-007介導(dǎo)的光動力療法治療骨肉瘤的實驗研究.pdf
- 熒光-磁共振成像引導(dǎo)光動力療法的酸敏感納米顆粒的構(gòu)建與評價.pdf
- 聚乙二醇包被納米TiO2運載Photosan介導(dǎo)胃癌光動力療法的研究.pdf
- 脊髓損傷修復(fù)的臨床研究
- 光動力療法對兔正常聲帶損傷的影響.pdf
- HSP70在急性脊髓損傷后的表達及GGA修復(fù)急性脊髓損傷的實驗研究.pdf
- 自體神經(jīng)延遲植入修復(fù)大鼠脊髓損傷的實驗研究.pdf
- 周圍神經(jīng)轉(zhuǎn)位修復(fù)脊髓損傷的實驗研究.pdf
評論
0/150
提交評論