負(fù)載Photosan的氧化鈦納米顆粒介導(dǎo)胰腺癌光動(dòng)力治療的體內(nèi)外研究.pdf

1、第一部分負(fù)載Photosan的氧化鈦納米顆粒對(duì)體外培養(yǎng)人胰腺癌細(xì)胞Panc-1的光動(dòng)力滅活作用
　　目的：
　　探求Photosan和中空二氧化鈦納米顆粒裝載的Photosan(簡(jiǎn)稱Nano-Photosan)介導(dǎo)的光動(dòng)力治療（Photodynamic Therapy，PDT）對(duì)體外培養(yǎng)人胰腺癌細(xì)胞Panc-1的療效。探索Photosan和負(fù)載Photosan的氧化鈦納米顆粒的殺傷效果及最佳滅活參數(shù)。
　　方法：

2、>　　1.MTT比色分析法測(cè)定Photosan及Nano-Photosan對(duì)正常胰腺細(xì)胞系H6C7及胰腺癌細(xì)胞系Panc-1的作用。
　　2.AnnexinⅤ-FITC/PI雙染標(biāo)記法檢測(cè)Photosan及Nano-Photosan導(dǎo)致的H6C7和細(xì)胞Panc-1凋亡與壞死。
　　結(jié)果：
　　1.MTT比色分析法結(jié)果顯示:僅使用光照或僅用光敏劑孵育均不影響正常胰腺細(xì)胞H6C7、胰腺癌細(xì)胞Panc-1的存活;兩種光敏劑的

3、光動(dòng)力滅活在一定范圍內(nèi)與光敏劑的濃度、孵育時(shí)間及單位面積光照劑量呈正相關(guān);相同參數(shù)設(shè)定下的Nano-Photosan較Photosan對(duì)細(xì)胞Panc-1具有更強(qiáng)殺傷作用;各自最佳應(yīng)用參數(shù)中，Photosan介導(dǎo)的PDT治療后4小時(shí)出現(xiàn)細(xì)胞Panc-1生長狀況欠佳;Nano-Photosan介導(dǎo)PDT治療后2小時(shí)出現(xiàn)細(xì)胞Panc-1生長狀況欠佳;Nano-Photosan比Photosan對(duì)細(xì)胞Panc-1的生長抑制效應(yīng)起效更快;兩種光敏

4、劑介導(dǎo)的PDT（使用最適參數(shù)）對(duì)正常胰腺H6C7細(xì)胞均未發(fā)現(xiàn)有明顯殺傷抑制作用。
　　2.AnnexinⅤ-FITC/PI雙染標(biāo)記法檢測(cè)顯示，Photosan介導(dǎo)PDT和Nano-Photosan介導(dǎo)PDT對(duì)細(xì)胞Panc-1的滅活效應(yīng)均以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡為主;在應(yīng)用各自最適參數(shù)處理后，Nano-Photosan介導(dǎo)PDT較Photosan介導(dǎo)PDT引起的細(xì)胞Panc-1整體凋亡壞死率高(P＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　1

5、.Photosan及Nano-Photosan均需要配合一定頻率的光波照射后方可通過細(xì)胞凋亡、壞死介導(dǎo)光動(dòng)力滅活作用。
　　2.Nano-Photosan介導(dǎo)PDT比Photosan介導(dǎo)PDT對(duì)細(xì)胞Panc-1系具有更快速、更強(qiáng)力、更高效的滅活效應(yīng)。兩種光敏劑介導(dǎo)的PDT治療對(duì)正常胰腺細(xì)胞可能無毒副作用。
　　3.Photosan介導(dǎo)PDT和Nano-Photosan介導(dǎo)PDT對(duì)細(xì)胞Panc-1株的殺傷作用主要通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋

6、亡來實(shí)現(xiàn)。
　　關(guān)鍵詞:光動(dòng)力療法;納米光敏劑;中空氧化鈦納米顆粒;胰腺癌;Panc-1細(xì)胞
　　第二部分在體評(píng)估Nano-Photosan介導(dǎo)PDT對(duì)胰腺癌的滅活作用
　　目的
　　構(gòu)建裸鼠人胰腺癌細(xì)胞Panc-1模型，評(píng)估Photosan及Nano-Photosan介導(dǎo)的光動(dòng)力治療對(duì)在體腫瘤生長的抑制效應(yīng)。
　　方法
　　1.構(gòu)建裸鼠人胰腺癌細(xì)胞Panc-1移植瘤模型。
　　2.觀察并比較P

7、hotosan及Nano-Photosan對(duì)裸鼠人胰腺癌移植瘤的治療效果及副反應(yīng)。
　　結(jié)果
　　1.人胰腺癌細(xì)胞Panc-1裸鼠移植成功率為100％，腫瘤平均體積達(dá)0.2cm3左右耗時(shí)7±2天。
　　2.從PDT治療后2天起，Photosan介導(dǎo)PDT治療組及Nano-Photosan介導(dǎo)PDT治療組與對(duì)照組腫瘤體積比較存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，而Photosan組與Nano-Photosan組比較從PDT治療

8、后第6天開始表現(xiàn)出統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。PDT治療組裸鼠移植瘤的重量及體積明顯較對(duì)照組為低，且Nano-Photosan組顯著小于Photosan組(P＜0.05)。
　　3.PDT治療后14天處死鼠腫塊HE染色鏡下觀察，Nano-Photosan組凋亡及壞死程度明顯高于Photosan組，Photosan組鼠癌細(xì)胞并未完全滅活，而Nano-Photosan組未見明顯存活癌細(xì)胞。
　　4.Photosan及Nano-P

9、hotosan給藥后裸鼠未發(fā)現(xiàn)明顯副作用及不良反應(yīng)。
　　結(jié)論
　　1.Photosan及Nano-Photosan均對(duì)人胰腺癌荷瘤裸鼠模型中腫瘤都具有治療效果，后者對(duì)胰腺癌的滅瘤效應(yīng)明顯優(yōu)于前者，且耗時(shí)短。
　　2.Photosan及Nano-Photosan介導(dǎo)的PDT對(duì)正常組織可能是安全的。
　　關(guān)鍵詞:二氧化鈦納米顆粒;光敏劑;光動(dòng)力療法;胰腺癌;胰腺癌裸鼠移植瘤
　　第三部分負(fù)載Photosan的

10、氧化鈦納米顆粒介導(dǎo)的PDT對(duì)人胰腺癌細(xì)胞Panc-1的作用及機(jī)制研究
　　目的
　　研究Nano-Photosan在PDT中對(duì)胰腺癌細(xì)胞Panc-1的光動(dòng)力滅活作用對(duì)細(xì)胞周期及自噬的影響并探討其機(jī)制。
　　方法
　　1.根據(jù)第一、二部分測(cè)定的光動(dòng)力最佳治療參數(shù)處理Panc-1細(xì)胞。PI單染結(jié)合流式細(xì)胞儀檢測(cè)Photosan及Nano-Photosan分別介導(dǎo)PDT后Panc-1細(xì)胞的周期分布。
　　2.實(shí)時(shí)

11、定量基因擴(kuò)增熒光檢測(cè)系統(tǒng)(Real-time Quantitative PCRDetecting System，RT-qPCR)檢測(cè)TGF-β1 mRNA表達(dá)變化;Western-blotting蛋白免疫印跡法檢測(cè)TGF-β1，LC3B及Beclin1基因的蛋白表達(dá)差異。
　　3.透射電鏡技術(shù)檢測(cè)Photosan及Nano-Photosan分別介導(dǎo)PDT后Panc-1細(xì)胞中的自噬現(xiàn)象。
　　結(jié)果
　　1.Nano-Ph

12、otosan介導(dǎo)PDT作用后，細(xì)胞Panc-1周期被阻滯于G1期。
　　2.相對(duì)于Photosan組，Nano-Photosan介導(dǎo)的PDT治療后TGF-β1含量顯著升高，而LC3B及Beclin1蛋白表達(dá)水平卻在治療后10小時(shí)內(nèi)明顯降低。
　　3.兩組光敏劑分別介導(dǎo)PDT后在在透射電鏡下發(fā)現(xiàn)兩者具有自噬小體和自噬小泡形成，但Nano-Photosan組自噬小體及自噬小泡數(shù)目顯著小于Photosan組自噬小體及自噬小泡的量。

13、
　　結(jié)論
　　1.Nano-Photosan介導(dǎo)的PDT作用后，細(xì)胞Panc-1的細(xì)胞周期被停滯于G1期。
　　2.PDT能夠誘導(dǎo)胰腺癌細(xì)胞Panc-1TGF-β1的表達(dá)水平升高從而抑制細(xì)胞增殖并使其趨向自噬，Nano-Photosan-PDT治療介入此環(huán)節(jié)并扭轉(zhuǎn)了TGF-β1對(duì)LC3B及Beclin1的上調(diào)趨勢(shì)。
　　3.經(jīng)Nano-Photosan介導(dǎo)的PDT處理后Panc-1細(xì)胞后的自噬水平較Photos