PSD-007介導的光動力療法治療骨肉瘤的實驗研究.pdf

1、第二軍醫(yī)大學博士學位論文PSD-007介導的光動力療法治療骨肉瘤的實驗研究姓名：胡碩申請學位級別：博士專業(yè)：外科學（骨外科）指導教師：蔡鄭東20100501g - 軍醫(yī)大學博士學位論文對三塊板都進行6 J ／c m 2 的光照射，照光完畢后更新培養(yǎng)基，分別培養(yǎng)1 5 m i n 、6 0 m i n 、9 0 m i n 后用M T T 法測定各孔O D 值，檢測光動力治療早期細胞的變化。所有實驗均重復3 次。在體內(nèi)實驗中，我們對4 周

2、齡雌性C 3 H 小鼠用于皮下種植L M 一8 細胞。我們將L M ．8 單細胞懸液注射到小鼠腰骶部皮下( 1 0 5 個／只) 。用游標卡尺測定腫瘤的生長。為了評估P S D ．0 0 7 在體內(nèi)腫瘤的光動力療效，當小鼠移植瘤直徑為6 ．8 毫米開始行光動力治療。我們對C 3 H 小鼠荷骨肉瘤L M ．8 模型靜脈注射P S D ．0 0 7 ( 5 、1 0 m g ／k g ) ，注射6 小時后，用6 3 0 n m 激光照射(

3、2 4 0 J ／c m 2 ) ，并選取H p D 作為光動力療效對照。( 每組7 只小鼠) 。光動力治療后，光照后避光飼養(yǎng)7 天，以避免皮膚刺激。在激光照射后0 、1 、3 、5 、7 天，測定腫瘤長度和寬度，然后用公式：【最長徑( I l l I l l ) 】+ 【最短徑( m m ) 】／2 代表腫瘤的體積。光動力治療后7 天，吸入乙醚使小鼠安樂死，測量其大小并取材稱取瘤重，并與未治療的對照組進行比較。同時將移植腫瘤行組織學檢

4、測，將切除的腫瘤標本，固定包埋后切取4 l a m 切片行蘇木和伊紅染色檢驗。此外，我們也研究了光動力作為減少腫瘤切除范圍( 即不包括周圍的正常組織的邊緣切除) 及減少腫瘤局部復發(fā)的輔助治療效果。當小鼠腫瘤直徑達1 0 ．1 2 毫米時，靜脈注射P S D ．0 0 7 后，邊緣切除腫瘤。我們將荷瘤小鼠模型分成三組( 1 ) 邊緣切除無光動力治療( 對照組) ，僅切除腫瘤而周圍的正常組織保留( 2 ) P S D 一0 0 7 5 m

5、g ／k g ，靜脈注射6 小時后行腫瘤邊緣切除，劑量2 4 0 J ／c m 2 激光照射( 3 ) P S D ．0 0 7 5 m g ／k g ，靜脈注射6 小時后行腫瘤邊緣切除，劑量3 6 0 J ／c m 2 激光照射( 每組n = 1 0 ) 。小鼠腫瘤邊緣切除后觀察4 周。我們使用F i s h e r ’S 精確概率檢驗法比較單獨邊緣切除治療組與手術聯(lián)合光動力治療組的腫瘤復發(fā)率。p < 0 ．0 5 可看作具有顯

6、著差異。結(jié)果：體外實驗表明P S D 一0 0 7 光動力療法對體外培養(yǎng)的M G ．6 3 細胞、L M ．8 細胞有明顯的殺傷作用。體外的光動力效應取決于光敏劑P S D ．0 0 7 治療濃度和激光的照射劑量。單獨用激光照射以及單獨注射P S D ．0 0 7 無激光照射均無抗腫瘤作用。相同P S D ．0 0 7 濃度下，激光照射的劑量越高，其抗腫瘤作用越強。通過直接殺傷及誘導凋亡兩種模式最終導致細胞死亡。小鼠荷瘤L M 一8 模

7、型的體內(nèi)試驗顯示，P S D ．0 0 7介導的光動力療法可以抑制腫瘤的生長。單獨注射P S D ．0 0 7 無激光照射或單純照光均沒有抑制腫瘤的生長。對荷瘤小鼠行腫瘤邊緣切除聯(lián)合局部光動力療法可以降低腫瘤的局部復發(fā)率。l O 只沒有聯(lián)合P D T 的小鼠，9 個在邊緣切除4 周后在病灶切緣出現(xiàn)局部復發(fā)。在1 0 只手術聯(lián)合P D T 治療的低劑量激光組( 2 4 0 J ／c m 2 ) d x 鼠中，4 個小鼠出現(xiàn)腫瘤局部復發(fā)。在