Nafamostat聯(lián)合甲強龍修復脊髓損傷的實驗研究.pdf

1、目的：
　　探討Nafamostat聯(lián)合甲基強的松龍(Methylprednisolone，MP)修復脊髓損傷(spinal cord injury, SCI)的實驗作用。
　　方法：
　　雌性Wistar大鼠80只，以IMPACTOR MODEL-Ⅱ建立大鼠T10節(jié)段脊髓損傷模型，隨機分成4組，每組20只，包括:Ⅰ組，對照組:腹腔注射生理鹽水10mg/kg，損傷后8h給藥一直持續(xù)到2w;Ⅱ組，Nafamostat組:

2、腹腔注射Nafamostat10mg/kg，損傷后8h給藥一直持續(xù)到2w;Ⅱ組，MP組:尾靜脈注射MP30mg/kg,損傷后8h給藥一次;Ⅳ組，聯(lián)合用藥組:腹腔注射Nafamostat10mg/kg，損傷后8h給藥一直持續(xù)到2w，尾靜脈注射MP10mg/kg，損傷后8h給藥一次。術后第1d、3d、5d、1w、2w、3w、4w、5w、6w、7w、8w采用BBB(Basso-Beattie-Bresnahan)評分對各組大鼠后肢功能恢復情況

3、進行評價。術后8w對大鼠脊髓組織行H-E(hematoxylin-eosin，H-E)染色、膠質原纖維酸性蛋白和神經絲蛋白免疫組織化學染色，觀察脊髓空洞、膠質瘢痕、神經元存活，LFB(Luxol Fast Blue，LFB)染色觀察皮質脊髓束，TUNEL(terminaldeoxynucleotidal transferase-mediated DUTP-biotin nick end labeling)染色判斷脊髓損傷后組織細胞凋亡情

4、況。
　　各種免疫熒光染色數字圖像結果經Image-Pro Plus6.0專業(yè)圖像分析軟件進行分析，以免疫陽性反應的累積光密度和陽性反應面積分別進行比較。采用方差分析對實驗結果進行統(tǒng)計學分析，比較各組的統(tǒng)計學差異，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。
　　結果：
　　脊髓損傷大鼠術后8wBBB評分為對照組5.53±1.18，Nafamostat組8.65±1.50，MP組8.06±1.16，聯(lián)合用藥組10.70±1.22

5、，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。HE染色結果顯示Nafamostat組、MP組、聯(lián)合用藥組脊髓空洞面積與數量明顯小于對照組，聯(lián)合用藥組空洞面積與數量少于其余3組。GFAP(glial fibrillaryacidic protein，GFAP)免疫組化染色結果顯示Nafamostat組、MP組、聯(lián)合用藥組膠質瘢痕形成數量相對于對照組明顯減少，聯(lián)合用藥組膠質瘢痕數量少于Nafamostat組/MP組。NF-200免疫組化染色結果顯示

6、染色結果顯示Nafamostat組、MP組、聯(lián)合用藥組與對照組相比神經細胞存留數量更多，聯(lián)合用藥組殘存神經細胞數量多于Nafamostat組/MP組，神經元能夠發(fā)出更長的軸突。LFB染色顯示聯(lián)合用藥與Nafamostat組/MP組相比保留髓鞘的范圍更大，有更多纖維束通過損傷中心。TUNEL染色結果顯示聯(lián)合用藥與Nafamostat組/MP組相比凋亡細胞數量更少。
　　結論：
　　聯(lián)合應用Nafamostat和MP治療大鼠脊髓