5-氨基乙酰丙酸介導(dǎo)的光動(dòng)力療法治療人神經(jīng)膠質(zhì)瘤.pdf

1、神經(jīng)膠質(zhì)瘤起源于神經(jīng)上皮組織，年發(fā)病率在（7～10）/10萬左右，是顱內(nèi)腫瘤最常見的惡性腫瘤，占40%～50%。該類腫瘤患者大多預(yù)后不良，膠質(zhì)母細(xì)胞瘤病人的平均生存期只有1年，僅少數(shù)病人可長(zhǎng)期生存。臨床上治療膠質(zhì)瘤大多采用綜合治療方案，包括手術(shù)、放療、化療等，但總體效果欠佳，近十年來膠質(zhì)瘤患者的生存率未見明顯提高，星形細(xì)胞瘤5年生存率約為30%左右。腫瘤光動(dòng)力療法(Photodynamic therapy,PDT)是20世紀(jì)80年代初興

2、起并逐漸發(fā)展起來的一種新的治療方法，通過一定給藥途徑，讓特定化學(xué)物質(zhì)在靶組織中選擇性濃集，這些特定的化學(xué)物質(zhì)在一定波長(zhǎng)的光作用下產(chǎn)生光動(dòng)力效應(yīng)而達(dá)到損傷或破壞靶組織的目的。光動(dòng)力療法這種特性非常適合腫瘤的輔助治療。國(guó)外文獻(xiàn)報(bào)道已經(jīng)把PDT成功運(yùn)用于皮膚腫瘤、消化道腫瘤的治療中，PDT是繼手術(shù)治療、化學(xué)治療、放射治療之后，腫瘤治療領(lǐng)域興起的一種新的輔助治療方法。本課題目的：探索新一代光敏劑5-氨基乙酰丙酸（5-aminolevulinic

3、 acid，5-ALA）介導(dǎo)的PDT治療腦膠質(zhì)瘤的可能，并探討其治療的可能機(jī)制，從而為臨床運(yùn)用PDT綜合治療腦膠質(zhì)瘤提供幫助。方法：通過體外實(shí)驗(yàn)方法，收集對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)的U251細(xì)胞，并以5-ALA介導(dǎo)PDT，再以CCK-8法計(jì)算U251細(xì)胞的存活率，以Hoechst 33258凋亡染色法及Annexin-V－PI染色法流式細(xì)胞術(shù)觀察U251細(xì)胞死亡的可能機(jī)制。結(jié)果：1.以常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)方法復(fù)蘇、培養(yǎng)U251人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞，生長(zhǎng)良好。2.通過

4、熒光顯微鏡觀測(cè)到：5-ALA與U251神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞共同培養(yǎng)，可以產(chǎn)生光敏劑原卟啉（PpIX）。且原卟啉（PpIX）大部分位于細(xì)胞的胞漿、胞膜，少部分位于核膜上，胞核內(nèi)未見PpIX產(chǎn)生。3.5-ALA本身對(duì)U251細(xì)胞并無細(xì)胞毒性作用。4.無給予5-ALA孵育而單純予激發(fā)光源照射U251細(xì)胞，其生存率無明顯差別。5.在相同的條件下，5-ALA 孵育時(shí)間不同，其介導(dǎo)PDT之后細(xì)胞存活率也顯著不同，孵育時(shí)間4-6小時(shí)，能讓細(xì)胞存活率最低。6

5、.在一定的5-ALA低濃度范圍內(nèi)，5-ALA介導(dǎo)的PDT殺傷作用與其濃度成正比，但在2.5mmol/l時(shí)出現(xiàn)了飽和現(xiàn)象。7.相同條件下，激光能量越大，5-ALA介導(dǎo)的PDT效果越明顯，但在累計(jì)能量達(dá)45J/cm2時(shí)也存在飽和現(xiàn)象。8.Hoechst 33258凋亡染色法發(fā)現(xiàn)PDT組有細(xì)胞凋亡現(xiàn)象，而非PDT組細(xì)胞基本無凋亡細(xì)胞。9. 使用Annexin V-FITC-碘化丙啶雙染色法的流式細(xì)胞術(shù)定量分析示：光動(dòng)力學(xué)治療組凋亡率、凋亡+壞