噬菌體作為病毒滅活指標(biāo)毒株的探索研究.pdf

1、消毒試驗(yàn)的指標(biāo)微生物，應(yīng)易于培養(yǎng)和檢測(cè)、生長(zhǎng)穩(wěn)定、形態(tài)典型、對(duì)消毒因子的抵抗力在同類微生物中有代表性、對(duì)人畜無(wú)毒或弱毒。在消毒與滅菌效果評(píng)價(jià)中，指標(biāo)微生物分為細(xì)菌繁殖體、分枝桿菌、細(xì)菌芽胞、真菌、病毒等。其中由于病毒試驗(yàn)要求高、培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)，特別是部分病毒還不能人工培養(yǎng)，因此，尋找病毒替代指標(biāo)微生物一直受到廣泛的關(guān)注。噬菌體是細(xì)菌的病毒，由核酸和外膜蛋白兩部分組成。噬菌體的生物學(xué)特性與甲型肝炎病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒相似，對(duì)消毒劑的抗力與致病

2、性腸道病毒相似，檢測(cè)方法較病毒簡(jiǎn)便，且對(duì)人不致病，因此噬菌體值得作為病毒污染和病毒滅活指示物進(jìn)行研究。 在消毒和防護(hù)效果的評(píng)價(jià)指標(biāo)中，需要一種既能代表病毒對(duì)常用消毒處理的抗力，又容易操作，對(duì)人安全無(wú)害的指標(biāo)微生物。本課題主要通過(guò)懸液定量病毒滅活試驗(yàn)，研究比較了三種噬菌體與脊髓灰質(zhì)病毒Ⅰ型疫苗株對(duì)外環(huán)境和三氯異氰尿酸溶液中有效氯的抗力，并以T7噬菌體為指標(biāo)毒株，觀察了含氯消毒劑濃度、作用時(shí)間、有機(jī)干擾物和溫度等因素對(duì)滅活病毒效果的

3、影響。主要結(jié)果總結(jié)如下： 1.三種噬菌體與脊髓灰質(zhì)病毒I型疫苗株對(duì)外環(huán)境抗力的比較 為了解噬菌體對(duì)外環(huán)境的抵抗力，采用懸液和載體定量試驗(yàn)方法，對(duì)F2噬菌體、T4噬菌體、T7噬菌體在干燥環(huán)境和潮濕環(huán)境中的抗力進(jìn)行了觀察，并與脊髓灰質(zhì)炎病毒作平行比較。結(jié)果，在溫度20℃、相對(duì)濕度8％-14％的干燥環(huán)境中，布片上脊髓灰質(zhì)炎病毒-1型疫苗株，于生物安全柜中放置2h，病毒滴度下降5個(gè)對(duì)數(shù)值；f2噬菌體、T4噬菌體和T7噬菌體在同樣

4、條件下放置72h其滴度分別下降1．98、3．43、2．83；在干燥的布片上，三種噬菌體與脊髓灰質(zhì)病毒Ⅰ型疫苗株的存活時(shí)間的長(zhǎng)短順序?yàn)椋篺2噬菌體>T7噬菌體>T4噬菌體>脊髓灰質(zhì)病毒Ⅰ型疫苗株(PV-1)。在模擬潮濕環(huán)境的標(biāo)準(zhǔn)硬水中存放14d，F(xiàn)2、T4、T7噬菌體下降的對(duì)數(shù)值依次為3．67、0．44、0．05，脊髓灰質(zhì)炎病毒下降對(duì)數(shù)值為1．72；三株噬菌體與脊髓灰質(zhì)病毒Ⅰ型疫苗株的存活時(shí)間的長(zhǎng)短順序?yàn)椋篢7噬菌體>T4噬菌體>脊髓灰質(zhì)

5、病毒I型疫苗株(PV-1)>f2噬菌體。結(jié)論，三種噬菌體和脊髓灰質(zhì)病毒Ⅰ型疫苗株在干燥或潮濕條件下均呈隨時(shí)間延長(zhǎng)其滴度逐漸下降：在干燥環(huán)境中滴度下降速度明顯快于潮濕環(huán)境；以T7噬菌體對(duì)干燥和潮濕環(huán)境耐受力最強(qiáng)。 2.三種噬菌體與脊髓灰質(zhì)病毒Ⅰ型疫苗株對(duì)三氯異氰尿酸消毒劑抗力的比較。 試驗(yàn)結(jié)果表明，三種噬菌體與脊髓灰質(zhì)炎病毒Ⅰ型疫苗株，對(duì)三氯異氰尿酸消毒劑的濃度系數(shù)(η值)由大到小的順序?yàn)椋篺2噬菌體>T4噬菌體>T7噬菌

6、體>脊髓灰質(zhì)炎病毒Ⅰ型疫苗株；在三氯異氰尿酸溶液中的有效氯含量為200mg／L時(shí)，各指標(biāo)毒株的抗力由大到小順序?yàn)椋篺2噬菌體>T4噬菌體>T7噬菌體>脊髓灰質(zhì)炎病毒Ⅰ型疫苗株，其速度常數(shù)(K值)的順序由小到大為：f2噬菌體

7、菌體對(duì)化學(xué)消毒劑的抗力僅略強(qiáng)于脊髓灰質(zhì)炎病毒Ⅰ型疫苗株。比較而言，T7噬菌體更符合消毒試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)菌株應(yīng)具備的條件。 3.T7噬菌體滅活試驗(yàn)影響因素的觀察 通過(guò)正交試驗(yàn)的直觀分析法和SAS統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)T7噬菌體滅活率的平方根反正弦轉(zhuǎn)換值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果表明，消毒劑濃度、滅活時(shí)間、小牛血清含量、消毒劑濃度與小牛血清含量的交互作用以及滅活時(shí)間與小牛血清含量的交互作用對(duì)T7噬菌體的滅活效果的影響均有顯著性意義，其對(duì)結(jié)果的影響程度由

8、大到小的順序?yàn)椋盒∨Ｑ搴?消毒劑濃度>滅活時(shí)間>滅活時(shí)間*小牛血清含量>消毒劑濃度木小牛血清含量；溫度、消毒劑濃度與滅活時(shí)間之間的交互作用對(duì)結(jié)果的影響無(wú)顯著性意義。4個(gè)因素對(duì)T7噬菌體滅活效果的影響程度依次為小牛血清的含量、消毒劑的濃度、滅活時(shí)間和溫度。 本課題通過(guò)對(duì)f2噬菌體、T7噬菌體、T4噬菌體與脊髓灰質(zhì)炎病毒作平行比較，得出如下結(jié)論：T7噬菌體不僅在外環(huán)境中生存能力最強(qiáng)，而且對(duì)三氯異氰尿酸溶液中有效氯的抗力與脊髓灰質(zhì)