Ⅰ群禽腺病毒滅活油乳劑苗的研究.pdf

1、本研究使用了過(guò)濾法及蔗糖梯度密度離心兩種方法制備了Ⅰ群禽腺病毒血清1型(FAV-1)全病毒作為包被抗原，分別建立了檢測(cè)Ⅰ群禽腺病毒抗體的兩種間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme1inkedimmunosorbentassay，ELISA)診斷方法?？乖罴寻粷舛确謩e為108.96copies/mL及109.16copies/mL，最佳血清稀釋度均為1：100。兩種ELISA方法檢測(cè)FAV-1陽(yáng)性對(duì)照血清，當(dāng)血清稀釋至6400倍及1280

2、0倍時(shí)，結(jié)果仍為陽(yáng)性；檢測(cè)禽流感病毒、新城疫病毒及禽乎腸孤病毒陽(yáng)性血清結(jié)果均為陰性，重復(fù)試驗(yàn)變異系數(shù)均小于5％。
　　 應(yīng)用兩種ELISA方法同時(shí)檢測(cè)了FAV-1滅活疫苗抗體水平及臨床檢查，比較結(jié)果表明：過(guò)濾法ELⅠSA在相同抗體水平上OD值平均高出26.46％，在低水平抗體的檢測(cè)上具有更高敏感性。本研究建立的診斷方法具有良好的特異性、敏感性和重復(fù)性，為Ⅰ群禽腺病毒免疫雞的抗體監(jiān)測(cè)和Ⅰ群禽腺病毒流行病學(xué)調(diào)查提供了一種快速、簡(jiǎn)便的

3、血清學(xué)診斷方法。
　　 為研制禽Ⅰ群腺病毒血清1型（FAV-1）油乳劑滅活疫苗，本實(shí)驗(yàn)室以FAV-1為種毒，進(jìn)行了病毒增殖條件的優(yōu)化，確定該病毒最佳接種劑量為105.4TCID50/mL，最佳收胚時(shí)間為72-96h。獲得病毒ELD50為109.31ELD50/mL、EID50為108.55EID50/mL、TCID50為108.14TCID50/mL，病毒粒子數(shù)為108.71copies/mL的抗原液制備成油乳劑滅活苗。比較了甲

4、醛及β-丙內(nèi)酯的滅活效果，確定甲醛滅活終濃度為0.1％，BPL最佳滅活終濃度為0.05％倍稀釋。
　　 進(jìn)行疫苗成分最佳配比的優(yōu)化，最后確認(rèn)HLB7.0，乳化劑含量10％，油水比為4:1的比例能提供最佳穩(wěn)定性及免疫效果。劑型檢驗(yàn)、穩(wěn)定檢測(cè)、粘度測(cè)定、無(wú)菌檢驗(yàn)、安全性檢測(cè)及保存期檢測(cè)均達(dá)到成品疫苗所需要求，最小免疫劑量為0.25mL。
　　 疫苗免疫抗體水平的監(jiān)測(cè)結(jié)果為在免疫后的第2周開始進(jìn)行免疫抗體水平的檢測(cè)。在免疫后的

5、第4周，也就是免疫后的第28天，免疫雞組的抗體水平達(dá)到了最高峰ELISAOD4500.96．而從免疫后第4周開始，抗體水平緩慢滑落，在免疫后第八周時(shí)維持ELISAOD4500.731的水平。根據(jù)免疫攻毒試驗(yàn)中免疫攻毒雞的排毒及發(fā)病率判定，本課題所研制疫苗對(duì)免疫組雞的保護(hù)率為100％，達(dá)到完全抵抗病毒的攻擊。
　　 田間動(dòng)物試驗(yàn)表明該疫苗在免疫初期FAV-1油苗抗體水平ELISAOD450可達(dá)1.103，達(dá)到預(yù)期免疫抗體水平，且在