兔波氏桿菌滅活苗佐劑篩選及免疫效果的研究.pdf

1、兔支氣管敗血波氏桿菌(Bb)是引起家兔慢性呼吸道疾病的主要病原，其致病病程長，難治愈，是嚴重影響兔產(chǎn)業(yè)的重要疾病，臨床上有該菌感染人的報道。目前，該病的疫苗還處于實驗室研究階段、保護率較低，開展高效的支氣管敗血波氏桿菌疫苗研究佐劑，提高疫苗對兔機體的保護效果，對改善兔產(chǎn)業(yè)體系健康發(fā)展及公共衛(wèi)生安全具有重要意義。本研究對不同的佐劑進行了篩選，對篩選出的新型佐劑苗木鱉子提取物(ECMS)+油佐劑苗與常規(guī)油佐劑苗及無佐劑苗進行了比較研究，對新

2、型佐劑進行了免疫增強作用的研究，新型佐劑苗不僅提高動物機體的體液免疫而且提高了其細胞免疫水平。本研究為兔波氏桿菌疫苗的研發(fā)提供了技術(shù)依據(jù)，同時也為獸用新型疫苗的開發(fā)提供了新的思路。
　　1.兔支氣管敗血波氏桿菌間接ELISA檢測方法的優(yōu)化
　　以兔Bb全菌蛋白包被酶標板，建立了Bb間接ELISA檢測方法。優(yōu)化的結(jié)果為:全菌蛋白(1μg/ml)37℃包被2h;封閉液為5％的脫脂乳，37℃作用2h;血清以1∶400稀釋后37℃作

3、用1h;二抗(1∶5000)37℃作用75 min;顯色條件為37℃避光作用10 min。陰陽性臨界值為0.19。該方法以其高敏感性、穩(wěn)定性以及高度的特異性，為波氏桿菌的抗體檢測提供了可靠的技術(shù)手段。
　　2.兔支氣管敗血波氏桿菌病滅活苗佐劑的篩選
　　本研究在波氏桿菌滅活苗中添加了不同劑量的ECMS，不同劑量ECMS+油，以及常規(guī)的礦物油和鋁膠佐劑，以上疫苗免疫家兔后不同時間采集血清，以不同蛋白作為包被抗原檢測血清抗體Ig

4、G，同時檢測血清中IL-2的含量等，攻毒前采集全血，MTT試驗檢測家兔的細胞免疫狀態(tài)，最后進行攻毒感染檢測疫苗保護率。結(jié)果顯示ECMS800+油組的抗全菌蛋白和外膜孔蛋白前體(PPP)抗體水平均不同程度高于其他各組，細胞因子IL-2的含量較其他各組均有上升的趨勢，ECMSS00+油組的淋巴細胞刺激指數(shù)在三種刺激物的刺激下均高于其他各組，兩次的攻毒保護率均最高，分別為78％和100％。綜上所述，比較篩選出ECMS800+油為最優(yōu)佐劑。

5、r>　　3.ECMS800+oil對兔支氣管敗血波氏桿菌滅活苗免疫增強作用的研究
　　本試驗用油佐劑苗及無佐劑苗作為對照，對篩選的ECMSS00+油苗進行免疫指標檢測，對其免疫增強作用進行了初步探究。家兔免疫后，間接ELISA檢測血清中IgG抗體水平、可溶性CD4(sCD4)及CD8分子(sCD8)含量以及器官粘膜中IgA抗體水乎;采集抗凝血MTT法檢測淋巴細胞轉(zhuǎn)化率、試劑盒檢測淋巴細胞上清中細胞因子IL-2、IFN-γ的表達量、