雞白痢沙門氏桿菌的分離鑒定及滅活菌苗的研制.pdf

1、本課題旨在把從疫源地分離鑒定的雞白痢沙門氏桿菌強(qiáng)毒株研制成油乳劑滅活菌苗和蜂膠滅活菌苗以預(yù)防雞白痢沙門氏桿菌病。從四川省、重慶市所屬的8個(gè)地區(qū)懷疑為雛雞白痢的發(fā)病雞只及雞白痢全血平板凝集呈陽(yáng)性的淘汰蛋雞共191只雞中，檢測(cè)到80只雞罹患雞白痢，在其體內(nèi)分離到雞白痢沙門氏桿菌21株，分離株在S·S瓊脂平板上呈園形、邊緣整齊、稍隆起、表面濕潤(rùn)、光滑、透明的露珠狀細(xì)小菌落，鏡檢為革蘭氏陰性(G-)、兩端鈍園、中等大小、散在排列的桿菌，三糖鐵瓊

2、脂培養(yǎng)基培養(yǎng)上層呈黃色，不利用乳糖、蔗糖，能產(chǎn)生硫化氫，具有賴氨酸脫羧酶和鳥氨酸脫羧酶，發(fā)酵糖類時(shí)均產(chǎn)生氣體，與沙門氏桿菌屬O多價(jià)(A-F)診斷血清反應(yīng)發(fā)生凝集，與單因子血清O1、O9、O12均呈現(xiàn)凝集，與單因子血清Ha、Hb、Hc、Hd和He均無(wú)凝集現(xiàn)象，證明這21株是雞白痢沙門氏桿菌，從中篩選出SR96-1、SC14-H、SC18-L3株強(qiáng)毒株，三強(qiáng)毒株攻毒雛雞，12h后有95％的雞發(fā)病，表現(xiàn)精神萎糜，畏寒，拉稀，糞便呈白色石膏樣粘

3、附于肛門周圍，32-48h可見死亡，剖解，肝臟嚴(yán)重壞死，肺臟嚴(yán)重出血，盲腸水腫，同時(shí)回收到分離株，攻毒二月齡育成雞和成年雞6天后剖殺，可見肝表面有針尖大小、數(shù)量不一的壞死灶，膽囊腫大，脾腫大，心包膜增厚，心包液增多，心外膜發(fā)炎或心肌壞死灶等變化，尤以肝病變?yōu)樽?。三?qiáng)毒株和標(biāo)準(zhǔn)株對(duì)雛雞的半數(shù)致死量LD50分別是SR96-1LD50=2.04×104個(gè)/只；SC14-HLD50==4.43×104個(gè)/只；SC18-LLD50=1.38×10

4、4個(gè)/只；標(biāo)準(zhǔn)株C79-13-4LD50=1.39×104個(gè)/只，對(duì)2月齡育成雞、成年雞的半數(shù)感染量ID50分別是1.197×108、1.897×108；雞白痢沙門氏桿菌標(biāo)準(zhǔn)株每ml含菌量是6.145×109個(gè)菌/ml。表明分離菌株的毒力強(qiáng)于或相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)株，具有地方代表性，可做菌苗候選株。用這三株強(qiáng)毒菌株和標(biāo)準(zhǔn)株C79-13-4，制備的蜂膠、白油為佐劑的雞白痢滅活菌苗，通過(guò)無(wú)菌檢驗(yàn)和安全性試驗(yàn)后免疫三日齡雛雞，于14天產(chǎn)生免疫力，保護(hù)率

5、分別為75％(蜂膠菌苗)、83.4％(油乳劑菌苗)；免疫成年蛋雞10天后，產(chǎn)生較高滴度的抗體，20-30天后群體水平達(dá)到高峰(1：64)，個(gè)別雞還可達(dá)1：128，35天后抗體下降到1：32。攻毒感染成年蛋雞的保護(hù)性試驗(yàn)血清學(xué)鑒定結(jié)果表明，油乳劑滅活苗組，肝、膽、脾及卵巢沒有分離到雞白痢沙門氏桿菌，而蜂膠苗組有三分之一的雞從肝分離到了雞白痢沙門氏桿菌。滅活苗免疫人工自然感染雞白痢沙門氏桿菌的成年蛋雞，產(chǎn)生了抗體，但從部分臟器能分離到病原。