2015-2016年華東地區(qū)禽沙門菌的分離鑒定及雞白痢凝集抗原的研制.pdf

1、沙門菌是當前最為重要的人獸共患病病原菌之一，能夠引起人和多種動物的急性或慢性傳染病。沙門菌能通過污染禽源性食品引起人的食物中毒，而養(yǎng)禽業(yè)濫用抗生素導致的沙門菌耐藥性增加也給人類的生命安全帶來嚴重威脅。因此，禽沙門菌病的防制具有十分重要的公共衛(wèi)生學意義。禽沙門菌的流行情況與耐藥性隨著時間和環(huán)境的變化而不斷改變，因此有必要對其進行持續(xù)跟蹤調(diào)查。在禽沙門菌病中危害養(yǎng)雞業(yè)最嚴重的是雞白痢，該病由雞白痢沙門菌引起，發(fā)病率高，既可水平傳播又可垂直傳

2、播。在沒有可靠疫苗使用的情況下，開展雞白痢的凈化工作是防控該病的重要措施。養(yǎng)殖場往往使用玻板凝集試驗進行檢疫，淘汰陽性雞，而雞白痢染色抗原是該檢疫方法的關鍵。我國目前使用的標準染色抗原是用早年分離的雞白痢沙門菌標準株C79-1和變異株C79-7制備而成，但近幾年在實際應用中發(fā)現(xiàn)，該染色抗原的敏感性不夠，因此有必要對抗原制備菌株進行進一步篩選。
　　本研究首先對2015-2016年華東地區(qū)臨床疑似禽病料進行沙門菌分離，利用多重PCR

3、方法及診斷血清進行鑒定，通過藥敏試驗測定沙門菌的耐藥性，為禽沙門菌的防控提供流行病學數(shù)據(jù)支撐。其次，通過對雞白痢沙門菌標準株C79-1、變異株C79-7及野生株的抗原性差異分析和對抗原制備培養(yǎng)基的評價，分析了我國現(xiàn)行標準抗原的亟待改進之處。最后從68株雞白痢沙門菌分離株中篩選得到適宜的抗原制備菌株，確定了染色抗原的制備方法，并在對自然感染雞的檢測效果上與標準抗原進行了比較。
　　1.2015-2016年華東地區(qū)禽沙門菌的分離鑒定及

4、耐藥性分析
　　從2015-2016年華東地區(qū)疑似沙門菌病家禽病料中進行沙門菌的分離培養(yǎng)，利用多重PCR法和血清診斷法進行血清型鑒定。結果顯示，共分離到68株沙門菌，其中鼠傷寒沙門菌33株，雞白痢沙門菌29株，腸炎沙門菌4株，紐波特沙門菌1株，邦戈爾沙門菌1株。雞源分離株以雞白痢沙門菌感染為主，占比為82.86％;鵝源和鴿源分離株以鼠傷寒沙門菌感染為主，占比分別為90.90％和85.71％。一年中沙門菌分離率較高的月份為3月、4月

5、和7月。紙片擴散法測定沙門菌分離株對23種抗生素的藥敏試驗結果顯示，當前沙門菌臨床分離株對青霉素、苯唑西林、紅霉素、利福平和萬古霉素的耐藥率均達90％以上，尤其對苯唑西林、利福平和萬古霉素的耐藥率達到了100％。對6種及以上抗生素的多重耐藥率達86.76％，可見當前禽沙門菌臨床分離株的多重耐藥現(xiàn)象仍十分嚴重。90％以上的分離株對頭孢唑啉、頭孢西丁、慶大霉素、新霉素、阿米卡星、氟苯尼考和氯霉素較為敏感。
　　2.我國雞白痢凝集抗原生

6、產(chǎn)用培養(yǎng)基的評價和菌株的抗原性分析
　　通過比較雞白痢沙門菌標準株C79-1、變異株C79-7及各野生株在LB和TG培養(yǎng)基的生長情況與連續(xù)傳代后的抗原性變化，確定生產(chǎn)抗原適宜的培養(yǎng)基。同時對高免血清和自然感染雞血清進行玻板凝集試驗，比較雞白痢沙門菌各野生株、標準株C79-1和變異株C79-7在敏感性、特異性及廣譜性方面的差異。試驗結果表明，與LB相比，TG培養(yǎng)基不但可以明顯提高各菌株的生長速度，而且經(jīng)過傳代后可以提高抗原的敏感度，

7、因此TG為生產(chǎn)抗原較適宜的培養(yǎng)基?？乖町惐容^結果發(fā)現(xiàn)，C79-1和C79-7抗原的廣譜性優(yōu)于各野生株，但野生株抗原檢測當前雞白痢流行株血清的敏感性要高于C79-1和C79-7。因此，在制備抗原時，可篩選適合的雞白痢沙門菌流行株作為目前我國標準抗原的補充。
　　3.雞白痢凝集抗原的篩選和制備
　　運用玻板凝集試驗對從華東地區(qū)臨床分離的68株雞白痢沙門菌進行交叉凝集價測定，初步篩選出抗原制備候選菌株。通過對50只人工感染雞抗體

8、水平的動態(tài)監(jiān)測和對100份自然感染雞血清樣品的檢測，進一步比較各候選抗原的特異性、敏感性和廣譜性。比較各候選菌株的生長速度和在人工培養(yǎng)基上的穩(wěn)定性，篩選出抗原制備菌株，確定自制抗原的組分。最后利用自制抗原對自然感染雞血清進行了檢測，并與中監(jiān)所抗原進行了比較。結果，雞白痢沙門菌分離株S44確定為抗原制備菌株，自制抗原的組分為50％的標準株C79-1和50％的野生株S44。在對三個自然感染雞群的檢測中，自制抗原的總陽性率比中監(jiān)所抗原分別提高