雞白痢雞傷寒沙門(mén)氏菌微型酶免疫傳感器研究.pdf

1、雞白痢沙門(mén)氏菌（Salmonella pullorum）和雞傷寒沙門(mén)氏菌（Salmonella gallinarum）能分別引起雞的白痢和傷寒疾病，一旦感染通常是兩病并發(fā)，發(fā)病率和死亡率極高，對(duì)國(guó)內(nèi)外家禽危害巨大，這兩種菌還常通過(guò)污染禽類食品傳播給人類，成為人食源性疾病的重要危害因素，對(duì)禽類養(yǎng)殖業(yè)和人類健康造成嚴(yán)重威脅。目前畜禽養(yǎng)殖業(yè)把防治食源性疾病提到了首要位置?？焖贉?zhǔn)確對(duì)雞白痢雞傷寒沙門(mén)氏菌造成的污染和疾病進(jìn)行及時(shí)的監(jiān)管、診斷、預(yù)警

2、和控制是非常必要的。
　　電化學(xué)酶免疫傳感器是一種將電化學(xué)檢測(cè)技術(shù)和酶免疫特異性技術(shù)相結(jié)合的方法，具有高靈敏度，快速高效，操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)，具有廣闊的潛在應(yīng)用前景[6-8]。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)電化學(xué)酶免疫傳感器的研究活躍，主要是在食品安全領(lǐng)域?qū)κ吃葱灾虏【?、毒素病毒和藥物殘留等的快速檢測(cè)的研究有一定的報(bào)道，但在動(dòng)物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的研究報(bào)道罕見(jiàn)。應(yīng)用新型材料和方法，例如石墨烯，納米金等，以改善電化學(xué)酶免疫傳感器的不足，制備新型的酶免疫傳感器是近年

3、來(lái)研究的熱點(diǎn)。
　　本論文主要圍繞以下幾個(gè)方面展開(kāi)研究工作:
　　1.基于電化學(xué)共沉積石墨烯納米金雞白痢雞傷寒沙門(mén)氏菌直接法酶免疫傳感器的研究
　　為研制一種新型的具有高靈敏度和穩(wěn)定性的電化學(xué)酶免疫傳感器，用于快速檢測(cè)S.pullorum& S.gallinarum，采用電化學(xué)還原法，將石墨烯(ERGO)與納米金(AuNPs)共沉積修飾于絲網(wǎng)印刷碳電極表面，建成電學(xué)和生物學(xué)相容性顯著改進(jìn)的ERGO-AuNPs電極，構(gòu)建

4、快速檢測(cè)S.pullorum& S.gallinarum的酶免疫傳感器。以硫堇為分子探針，采用循環(huán)伏安法(CV)和交流阻抗譜法(EIS)分別考察檢測(cè)過(guò)程不同修飾電極的電化學(xué)特性，并對(duì)相關(guān)檢測(cè)條件進(jìn)行優(yōu)化。研究結(jié)果顯示，在優(yōu)化的測(cè)定條件下，該酶免疫傳感器在S.pullorum& S.gallinarum濃度為103～109 cfu/mL時(shí)有良好的線性響應(yīng)，檢測(cè)限為1.6×102 cfu/mL(S/N=3)。該酶免疫傳感器靈敏度高、具有良好

5、的特異性和穩(wěn)定性（4℃放置30 d后，響應(yīng)電流為初始值的94.48％）。石墨烯和納米金共沉積形成的復(fù)合膜效果良好，為后續(xù)研究打下基礎(chǔ)。
　　2.基于電化學(xué)共沉積石墨烯納米金雞白痢雞傷寒沙門(mén)氏菌夾心法酶免疫傳感器的研究
　　為增強(qiáng)和改善響應(yīng)信號(hào)，嘗試研制一種新型快速檢測(cè)S.pullorum& S.gallinarum的電化學(xué)酶免疫傳感器。首先采用電化學(xué)還原法，將石墨烯(ERGO)與納米金(AuNPs)共沉積修飾于絲網(wǎng)印刷碳電極

6、表面，建成電學(xué)和生物學(xué)相容性顯著改進(jìn)的ERGO-AuNPs電極，并結(jié)合抗體-抗原-酶標(biāo)抗體的雙抗體夾心法，構(gòu)建一種快速檢測(cè)S.pullorum&S.gallinarum的酶免疫傳感器。以硫堇為分子探針，采用循環(huán)伏安法(CV)和交流阻抗譜法(EIS)考察檢測(cè)過(guò)程不同修飾電極的電化學(xué)特性，并優(yōu)化檢測(cè)條件。研究結(jié)果顯示，在優(yōu)化的測(cè)定條件下，該酶免疫傳感器在S.pullorum& S.gallinarum的濃度為103～109 cfu/mL時(shí)有

7、良好的線性響應(yīng)，檢測(cè)限為1.2×102 cfu/mL(S/N=3)。石墨烯和納米金共沉積形成的復(fù)合膜顯著提高電極表面電子傳遞能力，增大電流響應(yīng)信號(hào)，增強(qiáng)了酶免疫傳感器的靈敏度、特異性和穩(wěn)定性(4℃放置30 d后，響應(yīng)電流為初始值的97.14％)。不僅可以檢測(cè)S.pullorum& S.gallinarum，還可以成為研究快速檢測(cè)其它食源性致病菌及生物毒素等各類抗原物質(zhì)酶免疫傳感器的基礎(chǔ)模型。
　　3.基于電化學(xué)共沉積石墨烯納米金雞

8、白痢雞傷寒沙門(mén)氏菌間接法酶免疫傳感器的研究
　　為建立一種用于快速準(zhǔn)確檢測(cè)S.pullorum& S.gallinarum的新型電化學(xué)酶免疫傳感器，改善以往傳感器的不足，通過(guò)電化學(xué)還原法將石墨烯(ERGO)與納米金(AuNPs)共沉積修飾于絲網(wǎng)印刷碳電極表面作為基底電極固定載體，引入酶標(biāo)二抗利用間接法構(gòu)建電化學(xué)檢測(cè)方法。以硫堇為分子探針采用循環(huán)伏安法(CV)和交流阻抗譜法(EIS)考察不同修飾電極的電化學(xué)特性，并對(duì)檢測(cè)條件進(jìn)行優(yōu)化