傷寒沙門菌納米生物傳感器的研究.pdf

1、目的：
　　 通過物理方法將油脂熒光染料(4，4-Difluoro-5-(2-thienyl)-4-bora-3a，4a，-dia-z-as-indacene-3-dodecanoicacid，BODIPY558/568C12，以下簡稱BO558）摻入聚丁二炔(polydiacetylene，PDA)囊泡中，構(gòu)建一種PDA/BO558熒光混合囊泡，并對熒光混合囊泡的基本特性、熒光強度變化原理及機制進行初步探究；將傷寒沙門菌纖毛特

2、異性寡肽修飾于PDA/BO558熒光混合囊泡表面，構(gòu)建能夠識別傷寒沙門菌的寡肽納米生物傳感器，通過檢測寡肽納米生物傳感器與傷寒沙門菌反應而引起的熒光光譜強度的變化，從而建立一種可以快速檢測傷寒沙門菌的納米生物傳感器。
　　 方法：
　　 1．不同體系聚丁二炔囊泡的制備與表征：以PCDA單體、BO558為膜材，采用探頭超聲法制備兩種不同體系的聚丁二炔囊泡，分別是純PDA囊泡、PDA/BO558混合熒光囊泡。并采用透射電鏡負

3、染技術，對這兩種囊泡進行形貌表征；采用紫外可見光吸收光譜技術、熒光光譜技術，對這兩種囊泡進行特征吸收峰的表征。檢測PDA/BO558囊泡隨環(huán)境中酸堿度和溫度變化而產(chǎn)生的熒光光譜的變化及比色響應值的改變，并初步了解PDA/BO558納米囊泡熒光強度改變的特性。
　　 2．PDA/BO558混合熒光囊泡的傷寒沙門菌纖毛特異性寡肽修飾：將傷寒沙門菌纖毛特異性寡肽通過酰胺化反應修飾到PDA/BO558混合熒光囊泡的表面，并通過可見光吸收

4、光譜、熒光光譜檢測，計算寡肽的修飾效率，實現(xiàn)生物傳感器的組裝以及對傷寒沙門菌的特異識別。
　　 3．寡肽-納米生物傳感器的熒光光譜檢測：由于寡肽納米生物傳感器上的寡肽與傷寒沙門菌間能夠發(fā)生特異性識別并結(jié)合，利用此結(jié)合影響寡肽納米生物傳感器中聚丁二炔骨架構(gòu)型而引起的熒光共振能量轉(zhuǎn)移程度的改變，通過檢測反應前后寡肽納米生物傳感器熒光光譜575nm處熒光強度的變化來定性或定量檢測溶液中的傷寒沙門菌。并通過透射電子顯微鏡和激光共聚焦顯微

5、鏡對寡肽納米生物傳感器與傷寒沙門菌之間的作用進行驗證。
　　 結(jié)果：
　　 1．聚丁二炔囊泡的制備與表征：經(jīng)透射電鏡表征證實，純PDA、PDA/BO558混合體系均能形成囊泡，直徑40-100nm左右；經(jīng)254nm紫外光照射后，純PDA體系從無色變成藍色，PDA/BO558混合體系從粉色轉(zhuǎn)變成藍色。PDA/BO558囊泡的熒光強度隨環(huán)境中溫度的增加而升高，隨溶液中pH值的增加其熒光強度也有明顯的增加。在PDA/BO558

6、囊泡熒光強度的改變過程中，囊泡聚丁二炔共軛骨架的構(gòu)型也發(fā)生了變化，說明熒光強度的改變與囊泡骨架構(gòu)型的改變具有密切的關系。
　　 2．傷寒沙門菌特異性識別寡肽修飾PDA/BO558熒光囊泡：經(jīng)可見光吸收光譜、熒光光譜分析證實，成功將傷寒沙門菌纖毛特異性寡肽修飾到PDA/BO558熒光囊泡表面，經(jīng)過可見光吸收光譜、熒光光譜的檢測，計算其修飾率，修飾效率大約為80％。
　　 3．寡肽納米生物傳感器的傷寒沙門菌檢測：成功構(gòu)建一種

7、可以快速檢測傷寒沙門菌的納米生物傳感器，并經(jīng)透射電鏡和激光共聚焦顯微鏡證實。其不需要特殊儀囂，操作簡便，檢測時間短，僅需100min;靈敏度較高，檢出限為105CFU/mL;線性范圍為105～108CFU/mL;特異性強，對傷寒沙門菌的檢測特異性為100％，不與鼠傷寒沙門菌、腸致病性大腸桿菌O111、腸出血性大腸桿菌O157:H7、乙型副傷寒沙門菌、福氏志賀菌、宋內(nèi)志賀菌、單核細胞增生性李斯特菌等反應。
　　 結(jié)論：