豬胸膜肺炎放線(xiàn)桿菌強(qiáng)毒株的篩選及滅活苗的初步研制.pdf

1、豬傳染性胸膜肺炎（Porcine contagious pleuropneumonia，PCP）是由胸膜肺炎放線(xiàn)桿菌（Actinobacillus pleuropneumoniae，APP）引起的一種豬的接觸傳染性疾病。不同國(guó)家和地區(qū)流行的血清型不同，給養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。疫苗免疫接種是防治PCP的有效措施，但是目前商品化的APP疫苗主要是針對(duì)血清型1、2和7的，不能滿(mǎn)足特定地區(qū)流行的其他血清型的需求。本研究以前期分離鑒定的APP

2、安徽分離株和福建分離株為受試菌株，從中篩選出優(yōu)勢(shì)血清型和生物型的強(qiáng)毒株，研制二價(jià)滅活苗，旨在為安徽和福建省PCP的防控提供物質(zhì)基礎(chǔ)。
　　首先，從17株APP分離株中篩選強(qiáng)毒株。將17株APP分離株于37℃，150 rpm/min培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期，以7×107CFU/mL、1.4×108CFU/mL和2.8×108CFU/mL三個(gè)不同濃度菌液腹腔注射昆明系小鼠，根據(jù)小鼠死亡情況，初步確定分離株BB1502和FJ1508為強(qiáng)毒株。

3、>　　然后，采用細(xì)菌學(xué)方法測(cè)定分離株BB1502和 FJ1508對(duì)小鼠的半數(shù)致死量（LD50）；制作病理組織切片，觀察病理變化；以滅活后菌株免疫小鼠，測(cè)定其免疫原性、免疫保護(hù)性和交叉保護(hù)性。結(jié)果顯示，分離株BB1502和FJ1508對(duì)小鼠的LD50分別為4.9×108 CFU/mL和1.75×108 CFU/mL，多個(gè)組織病理變化明顯。鼠抗BB1502和FJ1508抗體的瓊擴(kuò)效價(jià)分別為1:32和1:16。BB1502滅活菌體對(duì)小鼠的免疫

4、保護(hù)率約為90％，F(xiàn)J1508滅活菌體的免疫保護(hù)率約為70%；BB1502滅活菌體對(duì)FJ1508菌株的免疫保護(hù)率約為10%，F(xiàn)J1508滅活菌體對(duì)菌株BB1502沒(méi)有保護(hù)力。結(jié)果表明，分離株BB1502和FJ1508具有良好的免疫原性和免疫保護(hù)性，可以作為疫苗候選菌株。
　　最后，將分離株BB1502和FJ1508滅活菌體按1:1比例混合，使兩株細(xì)菌的濃度均為3.0×109 CFU/mL，然后按9:1的比例加入氫氧化鋁膠佐劑混勻，

5、制備二價(jià)滅活苗，并對(duì)其進(jìn)行無(wú)菌檢驗(yàn)、安全性檢驗(yàn)和效力檢驗(yàn)。結(jié)果顯示，二價(jià)滅活苗穩(wěn)定性和安全性良好，對(duì)菌株BB1502和FJ1508的免疫保護(hù)力分別為90%和70%。
　　綜上所述，本研究通過(guò)對(duì)17株APP菌株毒力、抗原性與穩(wěn)定性的測(cè)定，成功篩選出BB1502（生物型I型，血清型12型）和FJ1508（生物型II型）兩株APP強(qiáng)毒株作為疫苗候選菌株，并研制了APP二價(jià)滅活苗，該疫苗對(duì)同型菌株攻擊小鼠具有較好的免疫保護(hù)作用，從而為AP