禽（番鴨）呼腸孤病毒感染油乳劑滅活苗的制備和免疫效果的研究.pdf

1、1997年以來，在我國(guó)南方番鴨養(yǎng)殖地區(qū)爆發(fā)一種新發(fā)疫病——禽(番鴨)呼腸孤病毒感染，俗稱番鴨“肝白點(diǎn)病”或“花肝病”，發(fā)病率20％～90％，死亡率10％～30％，應(yīng)激或混合感染時(shí)高達(dá)90％以上。由于該病潛伏期短(3～11天)，易感日齡小(1～10日齡)，雛番鴨免疫系統(tǒng)發(fā)育未成熟，難以產(chǎn)生足夠的抗體抵擋病毒的攻擊，所以獲得足夠的母源抗體是防控該病的重要手段。本研究以此為出發(fā)點(diǎn)，試制了禽(番鴨)呼腸孤病毒感染油乳劑滅活苗，用于免疫接種種番鴨

2、以產(chǎn)生母源抗體保護(hù)雛番鴨抵抗病毒的感染，為制定免疫程序防控該病提供重要的依據(jù)。 制備疫苗的種毒來源于本實(shí)驗(yàn)室分離保存的禽(番鴨)呼腸孤病毒YB分離株，該病毒株具有良好的抗原性和免疫原性。用番鴨胚成纖維細(xì)胞傳代培養(yǎng)，獲得病變集中、一致、病毒含量較高(TCID50為10-7.1934/0.1m1)的細(xì)胞毒，即為疫苗抗原液。疫苗抗原液經(jīng)0.3％甲醛溶液滅活后，用油乳佐劑乳化制成疫苗。 建立間接ELISA方法以檢測(cè)禽(番鴨)呼腸

3、孤病毒抗體滴度。經(jīng)二次差速離心、鹽析法濃縮提純細(xì)胞毒，獲得濃度為0.7355mg/ml病毒抗原液。制備了陽(yáng)性血清(瓊擴(kuò)效價(jià)為1∶16)、陰性血清、二抗(兔抗番鴨)陽(yáng)性血清(瓊擴(kuò)效價(jià)為1∶128)，提純二抗并標(biāo)記HRP酶，獲得合格的酶標(biāo)二抗。建立了間接ELISA檢測(cè)方法：抗原稀釋30倍，酶標(biāo)二抗稀釋50倍，血清稀釋50倍，臨界值為0.5。結(jié)果判定：以能產(chǎn)生陽(yáng)性反應(yīng)的血清最高稀釋度為該血清的終點(diǎn)抗體滴度。 制備的疫苗為油包水型乳白色

4、油狀物，穩(wěn)定性較好。經(jīng)檢驗(yàn)安全，番鴨無不良反應(yīng)。疫苗放置4℃冰箱保存3個(gè)月，免疫效力不變。用試制的疫苗于產(chǎn)前10天免疫種番鴨，皮下注射，1ml/只。免疫后14天，陽(yáng)轉(zhuǎn)率達(dá)100％，抗體水平持續(xù)上升，至免疫后60天，抗體滴度約保持在1∶700，此后抗體水平開始下降。取種番鴨免疫20天后產(chǎn)下的種蛋，孵出雛番鴨。3日齡雛番鴨母源抗體水平平均達(dá)到1∶200，7日齡時(shí)下降至1∶70，14日齡時(shí)檢測(cè)不到母源抗體。 當(dāng)免疫種番鴨抗體效價(jià)達(dá)到高

5、峰(抗體滴度1∶900)后，取其后代雛番鴨作為免疫組番鴨進(jìn)行保護(hù)力實(shí)驗(yàn)，未免疫種番鴨的后代雛番鴨則作為空白組。在進(jìn)行雛番鴨保護(hù)力實(shí)驗(yàn)前，預(yù)先攻毒一批雛番鴨，待其發(fā)病后，把感染發(fā)病的番鴨與免疫組、空白組番鴨同群飼喂，檢測(cè)母源抗體對(duì)雛番鴨的保護(hù)效果。結(jié)果表明：當(dāng)飼養(yǎng)同居群中感染發(fā)病鴨數(shù)量達(dá)到13％時(shí)，有母源抗體的雛番鴨存活率為60％。當(dāng)飼養(yǎng)同居群中感染發(fā)病鴨數(shù)量超過40％時(shí)，母源抗體無法保護(hù)雛番鴨不發(fā)病。當(dāng)攻毒劑量≤5×1041934TCI