可降解聚乳酸涂層雷帕霉素洗脫支架對(duì)血小板沉積影響的在體實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的： 為了解雷帕霉素、PLA以及兩者結(jié)合后對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)血小板在支架部位沉積的影響并為其臨床應(yīng)用及產(chǎn)品開(kāi)發(fā)提供試驗(yàn)數(shù)據(jù)支持，本研究探索：可降解PLA涂層雷帕霉素L605鈷鉻合金支架(實(shí)驗(yàn)組)、苯乙烯丁烯嵌段共聚物涂層雷帕霉素洗脫鈷基合金支架(商品名火鳥(niǎo)2支架)、PLA涂層L605鈷鉻合金支架、L605鈷鉻合金裸支架置入3天后血小板在支架表面的沉積情況以及之間的差異。方法本研究采用<'99m>TC體外標(biāo)記血小板并回輸體內(nèi)進(jìn)行γ計(jì)

2、數(shù)、放射活性測(cè)定的方法，以未置入支架的髂動(dòng)脈的血小板沉積情況為基本參照，定量研究不同支架置入髂動(dòng)脈3天以后體內(nèi)血小板在支架部位的沉積及其之間的差異。同時(shí)采用核素顯像及掃描電鏡觀察的方法定性研究血小板沉積情況。 定量研究：按表1在每只兔子的左右髂動(dòng)脈處分別置入一個(gè)支架，共置入5個(gè)可降解PLA涂層雷帕霉素支架、5個(gè)火鳥(niǎo)2支架、5個(gè)裸金屬支架、5個(gè)PLA涂層支架。3天后從耳緣靜脈抽取靜脈血并分離血小板，用<'99m>Tc標(biāo)記血小板后回

3、輸體內(nèi)，2小時(shí)后麻醉動(dòng)物進(jìn)行核素顯像，以確定核素全身分布及在支架部位有無(wú)核素顯影，處死動(dòng)物取材后再重復(fù)核素顯像，并和之前的核素顯像比較，以證明核素聚集部位是否是支架安放部位。同時(shí)將支架置入的髂動(dòng)脈段、未安放支架的髂動(dòng)脈段放入γ井中計(jì)數(shù)，并抽取全血標(biāo)本以測(cè)定游離和細(xì)胞結(jié)合<'99m>Tc的活性及血小板計(jì)數(shù)，并計(jì)算出血小板沉積數(shù)，最后將取材的標(biāo)本(支架置入的髂動(dòng)脈段、未置入支架的髂動(dòng)脈段)制備成掃描電鏡標(biāo)本進(jìn)行觀察，比較不同支架置入的血管段

4、血小板沉積的差異。 本研究所用支架均由微創(chuàng)醫(yī)療器械(上海)有限公司提供，攜帶雷帕霉素的劑量為9微克/毫米支架，PLA的劑量為400微克。 一、<'99m>Tc標(biāo)記血小板的方法學(xué)評(píng)價(jià)。 結(jié)合國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)及反復(fù)實(shí)驗(yàn)，改進(jìn)了目前國(guó)內(nèi)現(xiàn)有條件下<'99m>Tc標(biāo)記血小板的方法。結(jié)果表明：當(dāng)還原劑酒石酸亞錫溶液PH值為3、亞錫離子濃度為4.5mmol/L、水浴時(shí)間為30分鐘時(shí)，血小板標(biāo)記率最高且較為穩(wěn)定，為(29.7±3.6

5、)％，并且能使血小板保持一定的活性。 二、放射性核素體外顯像結(jié)果： 本研究在<'99m>Tc標(biāo)記的血小板回輸體內(nèi)后引入核素顯像的方法，動(dòng)態(tài)觀察核素在全身的分布情況，同時(shí)著重了解安放支架部位是否有核素聚集。首先發(fā)現(xiàn)：在回輸標(biāo)記血小板2小時(shí)后全身核素分布達(dá)到較為穩(wěn)定的狀態(tài)。此時(shí)，用雙探頭SPECT(Siemens，E.CAM)進(jìn)行全身平面顯像，共采集300K計(jì)數(shù)，結(jié)果顯示：核素主要濃聚于肝、脾、雙腎、膀胱及安放支架處，其中可

6、降解PLA涂層雷帕霉素支架顯像最為明顯，裸金屬支架部位不顯像，其余2個(gè)支架組部分顯像并且不明顯。然后，對(duì)支架置入部位進(jìn)行局部顯像，共采集100K計(jì)數(shù)，結(jié)果顯示：核素在部分安放支架部位有核素聚集并顯像。最后，處死動(dòng)物將安放支架血管取走后，再次進(jìn)行核素顯像，發(fā)現(xiàn)原支架安放部位幾乎沒(méi)有核素的濃聚。 三、不同支架對(duì)血小板沉積影響的定量研究： 本研究以可降解PLA涂層雷帕霉素支架為實(shí)驗(yàn)組，以PLA涂層支架、火鳥(niǎo)2支架、裸金屬支架為

7、對(duì)照組，以未安放支架的髂動(dòng)脈組為空白對(duì)照組，以血小板沉積數(shù)為指標(biāo)，比較各組對(duì)血小板沉積的影響差異，結(jié)果如表2、表3。在血小板標(biāo)記率及全血血小板計(jì)數(shù)兩項(xiàng)指標(biāo)上，各組沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。備注：A：可降解PLA涂層Rap鋤ycin L605鈷鉻合金支架組 B：可降解PLA涂層支架組 C：火鳥(niǎo)2支架組D：L605鈷鉻合金裸支架組 E：未安放支架的髂動(dòng)脈組結(jié)果表明，可降解PLA涂層Rapamycin L605鈷鉻合金支架較對(duì)照組火鳥(niǎo)2

8、支架明顯增加血小板沉積，PLA涂層支架本身也顯著增加血小板沉積。 四、掃描電鏡結(jié)果： 本研究對(duì)實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組支架置入的髂動(dòng)脈段以及未置入支架的髂動(dòng)脈段進(jìn)行掃描電鏡的觀察，結(jié)合血小板人工計(jì)數(shù)半定量分析，結(jié)果表明：與定量分析結(jié)果一致，PLA涂層攜載雷帕霉素支架組在支架部位的血小板沉積在所有組中最多，其次血小板沉積較多的是火鳥(niǎo)2支架組和PLA涂層支架組，BMS支架組在支架部位的血小板沉積較少，未置入支架髂動(dòng)脈組局部血小板沉積最

9、少。 1、經(jīng)過(guò)本研究改進(jìn)的、在國(guó)內(nèi)現(xiàn)有實(shí)驗(yàn)條件下利用<'99m>Tc標(biāo)記血小板的方法，具有標(biāo)記率較高、穩(wěn)定、血小板活性受影響小、簡(jiǎn)便廉價(jià)等優(yōu)點(diǎn)，是目前國(guó)內(nèi)標(biāo)記血小板方法的理想選擇。 2、支架所攜帶的雷帕霉素及可降解PLA涂層在體內(nèi)分別能增加支架部位血小板的沉積(P<0.05)；可降解PLA涂層雷帕霉素支架較苯乙烯丁烯嵌段共聚物涂層雷帕霉素支架能更進(jìn)一步的顯著增加支架部位的血小板沉積CP<0.05)，此點(diǎn)在支架的設(shè)計(jì)上必須