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文檔簡介
1、從堿性土壤中分離得到一株高產(chǎn)堿性果膠酶的菌株TCCC11286，對該菌株進行形態(tài)特征和生理生化鑒定，確定其為革蘭氏陽性，桿菌，有芽孢；并用16SrDNA方法分析，該菌株與枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)的序列相似性為99％，因而鑒定其為枯草芽孢桿菌(B.subtilis)。
利用單因素實驗對枯草芽孢桿菌TCCC11286的發(fā)酵條件進行優(yōu)化。采用Plackett-Burman(P-B)方法篩選出對產(chǎn)酶有重要
2、影響的3個因素(豆餅粉，MgSO4以及FeSO4的添加量)，并采用響應面試驗設計(RSM)對重要因素進行優(yōu)化。最佳培養(yǎng)基為：玉米粉4％，豆餅粉3.55％，MgSO40.034％，(NH4)2SO40.4％，磷酸鹽0.05 mol/L，F(xiàn)eSO40.013％。最佳培養(yǎng)條件為：種齡12 h，接種量8％，培養(yǎng)溫度37℃，發(fā)酵周期24 h。在此條件下產(chǎn)酶率為14.82 U/mL。
通過對酶學性質(zhì)的研究可得知：酶的最適反應溫度為45
3、℃-55℃，最適酶作用pH8.5-9.5；酶的熱穩(wěn)定性實驗結果表明：在45℃-60℃時均可保持較高的活性，大于60℃時，酶活顯著下降；酶的pH穩(wěn)定性實驗結果表明：在45℃條件下，分別于不同pH值的底物溶液中保溫30 min，在pH8.0-10.0范圍內(nèi)穩(wěn)定性較好。
堿性果膠酶粗酶經(jīng)過硫酸銨鹽析，透析袋濃縮，通過SDS-PAGE電泳，測定出其相對分子質(zhì)量約為41kD。
應用蛋白雙向電泳技術研究了枯草芽孢桿菌不同
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