MCM5、MCM7在宮頸癌及癌前病變中的表達(dá)及與HPV16感染的關(guān)系.pdf

1、目的：世界范圍內(nèi)，宮頸癌的發(fā)病率和死亡率居女性惡性腫瘤的第二位，而且近年來(lái)發(fā)病趨于年輕化。在其發(fā)生前常經(jīng)歷一個(gè)較長(zhǎng)時(shí)間的癌前病變過(guò)程。因此，宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變(cervicalintraepithelialneoplasia，CIN)的早期診斷成為臨床上降低宮頸癌發(fā)病率和死亡率的有效方法。目前認(rèn)為人乳頭瘤病毒(Humanpapillomavirus，HPV)感染是宮頸癌的主要致病原因。所以，HPV感染和CIN的處理，成為防治宮頸癌的關(guān)鍵

2、。而癌前病變過(guò)程中生物分子水平的異常，將為宮頸癌前病變的早期診斷提供一種有效生物標(biāo)志物、突破口。本試驗(yàn)的目的是觀察MCM5、MCM7在宮頸癌前病變和宮頸癌中的表達(dá)及與HPV16感染的關(guān)系，進(jìn)一步探討MCM5、MCM7在宮頸癌發(fā)生、發(fā)展中的作用，為宮頸癌的篩查、隨訪、預(yù)后及HPV感染的監(jiān)測(cè)提供新的更可靠的生物學(xué)標(biāo)志物。 方法：1.免疫組化檢測(cè)MCM5、MCM7的表達(dá)：MCM5、MCM7均采用免疫組織化學(xué)鏈霉菌抗生物素蛋白—過(guò)氧化物

3、酶連接法(SP)，實(shí)驗(yàn)步驟按試劑說(shuō)明書進(jìn)行。以積分光密度(IOD)表示其抗原陽(yáng)性的相對(duì)表達(dá)量。 2.半定量RT-PCR檢測(cè)MCM5、MCM7、HPV16E7的表達(dá)：按照Trizol提取試劑盒說(shuō)明提取組織總RNA，在37℃的條件下進(jìn)行cDNA合成。取cDNA2μl，應(yīng)用相應(yīng)的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增。擴(kuò)增產(chǎn)物在瓊脂糖凝膠上進(jìn)行電泳，并進(jìn)行產(chǎn)物分析。 結(jié)果： 1.MCM5、MCM7免疫組化染色的形態(tài)學(xué)特點(diǎn)：MCM5、MCM

4、7蛋白陽(yáng)性染色位于細(xì)胞核，在慢性炎癥的宮頸組織中僅基底及基底上方1～2層副基底層可見(jiàn)陽(yáng)性細(xì)胞。不同程度不典型增生者，其陽(yáng)性細(xì)胞上移數(shù)層不等。浸潤(rùn)癌陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯增多，其分布失去規(guī)律，多呈彌散性分布于上皮全層并浸潤(rùn)間質(zhì)(見(jiàn)Fig.1～Fig.8)。 2.MCM5蛋白在不同宮頸病變組織中的表達(dá)：MCM5蛋白的表達(dá)從慢性炎癥到浸潤(rùn)癌呈漸進(jìn)性增高。慢性宮頸炎組、CINⅠ組、CINⅡ～Ⅲ及宮頸癌組，各組之間相比，差異均有顯著性(P＜0.0

5、5)(見(jiàn)Table1)。 3.MCM7蛋白在不同宮頸病變組織中的表達(dá)：MCM7蛋白的表達(dá)從慢性炎癥到浸潤(rùn)癌呈漸進(jìn)性增高，慢性宮頸炎組及CINⅠ組分別與CINⅡ～Ⅲ組及宮頸癌組相比，差異均有顯著性(P＜0.05)；CINⅡ～Ⅲ組與宮頸癌組相比，差異有顯著性(P＜0.05)；慢性宮頸炎組與CINⅠ組相比，差異無(wú)顯著性(P＞0.05)(見(jiàn)Table1)。 4.HPV16E7mRNA在不同宮頸病變組織中的表達(dá)：不同宮頸病變組織中

6、HPV16E7mRNA隨著宮頸病變程度的增加而升高。CINⅡ～Ⅲ組及宮頸癌組分別與慢性宮頸炎組及CINⅠ組相比，差異均有顯著性(P＜0.05)，宮頸癌組與CINⅡ～Ⅲ組，CINⅠ組與慢性宮頸炎組相比，差異無(wú)顯著性(P＞0.05)(見(jiàn)Fig.9、Fig.12、Table2)。 5.MCM5mRNA在不同宮頸病變組織中的表達(dá)：MCM5mRNA的表達(dá)隨著宮頸病變程度的增加而升高。慢性宮頸炎組、CINⅠ組、CINⅡ～Ⅲ及宮頸癌組，各組之

7、間相比，差異均有顯著性(P＜0.05)(見(jiàn)Fig.10、Fig.12、Table3)。 6.MCM7mRNA在不同宮頸病變組織中的表達(dá)：不同宮頸病變組織中MCM7mRNA表達(dá)水平隨著宮頸病變程度的增加而升高。慢性宮頸炎組及CINⅠ組分別與CINⅡ～Ⅲ及宮頸癌組相比，差異均有顯著性(P＜0.05)；CINⅡ～Ⅲ組與宮頸癌組相比，差異有顯著性(P＜0.05)；慢性宮頸炎組與CINⅠ組相比，差異無(wú)顯著性(P＞0.05)。 7.

8、宮頸浸潤(rùn)癌中MCM5、MCM7的表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系：方差分析表明MCM5、MCM7mRNA和蛋白的表達(dá)隨著腫瘤分化程度的增加而逐漸減少，低分化鱗癌明顯高于中分化鱗癌和高分化鱗癌，中分化鱗癌高于高分化鱗癌，差異均有顯著性(P＜0.05)，MCM5、MCM7mRNA和蛋白表達(dá)水平與年齡、臨床分期之間差異無(wú)顯著性(P＞0.05)。 8.MCM5、MCM7、HPV16E7表達(dá)的相關(guān)性分析：在CIN中，MCM7mRNA和蛋白在HPV

9、16陽(yáng)性組表達(dá)水平明顯高于陰性組，差異均有顯著性(P＜0.05)；MCM5mRNA和蛋白在HPV16陽(yáng)性組和陰性組的表達(dá)差異均無(wú)顯著性(P＞0.05)。相關(guān)分析表明，在浸潤(rùn)癌中MCM7與HPV16E7表達(dá)水平呈正相關(guān)；MCM7與MCM5表達(dá)水平呈正相關(guān)；MCM5與HPV16E7表達(dá)水平無(wú)相關(guān)性。 結(jié)論：1.HPV16E7mRNA的表達(dá)水平與宮頸病變的進(jìn)展相關(guān)。 2.MCM5的表達(dá)隨宮頸病變的進(jìn)展逐漸增加；MCM7的表達(dá)在