宮頸癌及癌前病變組織中HPV16 E7與HLA-Ⅰ類分子表達(dá)相關(guān)性研究.pdf

1、目的 研究宮頸癌及癌前病變組織中人乳頭瘤病毒16型(HPVl6)E7基因含量、人白細(xì)胞抗原I類分子(HLA-I)表達(dá)與宮頸疾病惡性進(jìn)展三者間的相關(guān)關(guān)系，并探討HPVl6E7可能的致癌機(jī)制。 方法 1．實(shí)時(shí)熒光定量測(cè)定HPVl6 E7基因：提取467例山東婦女宮頸各級(jí)病變組織DNA，以人乳頭瘤病毒16型(HPV16)E7基因作為擴(kuò)增的靶基因，同時(shí)以人β-肌動(dòng)蛋白基因片段作為內(nèi)參照，借助于設(shè)計(jì)的目的基因引物及特異性熒

2、光探針，建立各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線，用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(RFQ-PCR)同時(shí)擴(kuò)增兩個(gè)基因片段。為消除標(biāo)本間在DNA提取和產(chǎn)量方面存在的差異，以E7和β-肌動(dòng)蛋白的含量比值(CE/Cβ，即單位細(xì)胞內(nèi)HPVl6E7含量)作為評(píng)價(jià)組織所含HPVl6E7 DNA載量的指標(biāo)。 2．免疫組化S-P染色：石蠟切片經(jīng)二甲苯常規(guī)脫蠟，梯度酒精水化后入枸櫞酸鹽修復(fù)液，98℃熱修復(fù)15 min；冰凍切片室溫干燥后入冰丙酮固定10min。經(jīng)上述預(yù)處理后

3、，所有切片按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行免疫組化染色以測(cè)定HLA-I類分子表達(dá)情況。用PBS緩沖液代替一抗作陰性對(duì)照；用以前實(shí)驗(yàn)中宮頸炎陽(yáng)性標(biāo)本作陽(yáng)性對(duì)照，正常淋巴細(xì)胞作內(nèi)參照。 結(jié)果 1．在β-肌動(dòng)蛋白陽(yáng)性的宮頸各級(jí)病變組織中，HPVl6E7含量(中位數(shù))在宮頸鱗癌組最高(2453拷貝/細(xì)胞)，其次分別為宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)組(44.96拷貝/細(xì)胞)、宮頸腺癌組(18.6拷貝/細(xì)胞)及宮頸炎組(0拷貝/細(xì)胞)；其中宮頸癌組與宮頸

4、炎組、宮頸癌組與CIN組、CIN組與宮頸炎組間HPV16E7含量差異有顯著性意義，P值均<0.001。HPV16E7含量隨病情加重(從宮頸炎到宮頸癌)呈上升趨勢(shì)，二者呈顯著正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為0.848(P<0.001)。 2.HPV16E7陽(yáng)性率在宮頸鱗癌組、宮頸腺癌組、宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)組和宮頸炎組分別為98.3﹪、22.6﹪、78.8﹪、10.5﹪。病毒陽(yáng)性率在鱗癌組與宮頸炎組、CIN組與宮頸炎組、腺癌組與宮頸炎組、

5、鱗癌組與宮頸腺癌組、鱗癌組與CIN組、CIN組與腺癌組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。 3.HLA-I類分子表達(dá)率隨宮頸病變程度進(jìn)行性下降，相關(guān)系數(shù)為0.434(P<0.001)。HLA-I類分子陽(yáng)性率在鱗癌組與宮頸炎組、CIN組與宮頸炎組、腺癌組與宮頸炎組、腺癌組與鱗癌組、鱗癌組與CIN組、腺癌組與CIN組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。 4.宮頸癌及癌前病變組織中HPV16病毒感染與HLA-I類抗原缺失高度相