夜香樹花提取物抗腫瘤作用的實驗研究.pdf

1、目的：確定夜香樹花（簡稱：CN花）提取物中的有效部位，探討其在體內體外抗腫瘤作用和誘導腫瘤細胞凋亡的作用、以及對脾免疫細胞的影響。
　　方法：
　　1.先后用95％乙醇和50%乙醇對 CN花進行回流提取得浸膏，再按極性遞增原則回流提取得到石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、95%乙醇五個不同的部位；
　　2.對不同部位（包括總提取物）進行體外抗腫瘤的實驗研究：即通過MTT法和集落形成法，觀察其對人胃癌細胞 SGC7901、

2、黑色素瘤細胞B16、人肝癌細胞 Bele7404、白血病細胞 L1210和P388、人宮頸癌細胞 Hela增殖的影響情況，并通過倒臵顯微鏡觀察細胞形態(tài)，確定出有效部位；
　　3.對有效部位進行急性毒性實驗，確定出最大耐受量或LD50，為進行下一步研究奠定基礎；
　　4.對有效部位的含藥血清進行體外抗腫瘤作用的實驗研究，初步判定其在體內是否具有抑制腫瘤的作用，為下一步將腫瘤移植到動物體內進行體內抗腫瘤實驗奠定基礎；
　　

3、5.對有效部位進行體內抗腫瘤的研究：即建立 H22實體瘤和S180腹水瘤模型，觀察其對H22實體瘤增殖的影響和對S180荷瘤小鼠生命延長率的影響；
　　6.對有效部位進行小鼠脾臟淋巴細胞增殖反應的研究，觀察其對脾免疫細胞的影響；
　　7.對有效部位進行體內體外誘導腫瘤細胞凋亡的實驗研究，觀察其在體外和體內對腫瘤細胞周期及細胞凋亡的影響。
　　結果：
　　1.總提取物、正丁醇部位、95%乙醇部位在體外對人胃癌細胞S

4、GC7901、黑色素瘤細胞B16、人肝癌細胞Bele7404、白血病細胞L1210和P388、人宮頸癌細胞He la的增殖有較好的抑制作用，且有效成分主要集中在正丁醇部位和95%乙醇部位；
　　2.總提取物的LD50>10g/kg，表明其毒性小或潛在危險??；
　　3. CN花總提取物的含藥血清在體外可較好的抑制宮頸癌細胞 Hela的增殖，表明其可能在體內對腫瘤具有抑制作用，為下一步將腫瘤移植到動物體內進行體內抗腫瘤實驗奠定基

5、礎；
　　4.總提取物、正丁醇部位、95%乙醇部位可抑制小鼠H22實體瘤的增殖，也可明顯提高S180小鼠的生命延長率；
　　5.總提取物、正丁醇部位和95%乙醇部位可促進 ConA、LPS誘導狀態(tài)下的脾T、B淋巴細胞的增殖，濃度約為20μg/ml下效果最顯著；
　　6. FCM法檢測顯示：總提取物在體內，可能是通過阻斷H22實體瘤細胞和S180腹水瘤細胞由G0/G1期進入S期，而誘導細胞凋亡；在體外，可能是通過阻斷宮頸

6、癌細胞Hela由S期進入G2/M期，而誘導細胞凋亡。
　　結論：總提取物、正丁醇部位和95%乙醇部位在體外對不同組織來源的腫瘤細胞的增殖具有明顯的抑制作用；CN花總提取物的LD50較大，其毒性較小；CN花總提取物的含藥血清在體外可較好的抑制宮頸癌細胞Hela的增殖；總提取物、正丁醇部位和95%乙醇部位在體內可抑制荷瘤小鼠的瘤體的生長，明顯延長荷瘤小鼠的存活期；對誘導狀態(tài)下的脾T、B淋巴細胞的增殖有一定的促進作用；CN花總提取物在體