2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡(jiǎn)介

1、目的:探討夜香樹提取物Nocturnoside B在體內(nèi)體外對(duì)人白血病K562細(xì)胞的作用,并探討其可能的機(jī)制。
  方法:(1)用MTT檢測(cè)不同濃度的Nocturnoside B對(duì)人白血病K562細(xì)胞的增殖抑制作用,并觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變。(2)應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率,用Annexin V/PI雙標(biāo)記法、TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞的早期凋亡變化。(3)通過檢測(cè)細(xì)胞中 Caspase-3酶活性、蛋白質(zhì)印跡法(Western

2、Blotting)檢測(cè)凋亡蛋白Caspase-3、細(xì)胞質(zhì)和線粒體內(nèi)細(xì)胞色素C表達(dá),以及DNA瓊脂糖凝膠電泳分析法檢測(cè)DNA圖譜的變化來闡述 Nocturnoside B體外誘導(dǎo) K562細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制。(4)對(duì)Nocturnoside B進(jìn)行急性毒性實(shí)驗(yàn),確定其LD50,為進(jìn)行下一步研究奠定基礎(chǔ)。(5)通過尾靜脈注射 K562細(xì)胞的方法建立 SCID小鼠人白血病模型,采用外周血細(xì)胞分類計(jì)數(shù)法,化學(xué)免疫學(xué)病理檢查以及骨髓涂片細(xì)胞形態(tài)檢

3、測(cè)等方法確定 Nocturnoside B在體內(nèi)對(duì)人白血病 K562細(xì)胞動(dòng)物模型的作用。(6)通過 FCM檢測(cè)CD13表達(dá)率以及Western blotting檢測(cè)脾臟組織中PI3K、AKT及PTEN蛋白的表達(dá)情況來闡述Nocturnoside B對(duì)人白血病K562細(xì)胞動(dòng)物模型作用的可能機(jī)制。
  結(jié)果:(1)Nocturnoside B對(duì)K562細(xì)胞生長(zhǎng)具有顯著的抑制作用,并呈劑量-時(shí)間依賴性。(2)Nocturnoside B

4、可誘導(dǎo) K562細(xì)胞凋亡,經(jīng)Nocturnoside B處理后的K562細(xì)胞Annexin V+/P-細(xì)胞顯著增加,在熒光下可觀察到TUNEL細(xì)胞涂片有明顯的熒光效應(yīng)。(3)經(jīng)Nocturnoside B處理后的 K562細(xì)胞 DNA電泳呈梯形條帶,并且可以活化細(xì)胞中Caspase-3酶活性以及促進(jìn)線粒體細(xì)胞色C的釋放。(4)Nocturnoside B的LD50=31.02 mg/kg,表明其有一定的毒性。(5)成功建立SCID人白血

5、病動(dòng)物模型后,經(jīng)Nocturnoside B治療后,與對(duì)照組比較,Nocturnoside B組白細(xì)胞總數(shù)和CD13陽性表達(dá)率明顯下降,高劑量組的白細(xì)胞總數(shù)和CD13陽性表達(dá)率明顯下降(P<0.05);Western Blotting檢測(cè)結(jié)果亦顯示, Nocturnoside B治療組和CY組的PI3K蛋白的表達(dá)水平下調(diào),而AKT、PTEN蛋白的表達(dá)水平則明顯高于陰性對(duì)照組;與陰性對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
 

6、 結(jié)論:(1)Nocturnoside B在體外能有效抑制K562細(xì)胞的增殖,并且可以活化細(xì)胞中Caspase-3酶活性以及促進(jìn)線粒體細(xì)胞色素C的釋放,損傷其 DNA從而誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡。(2)Nocturnoside B可以抑制人移植性白血病動(dòng)物模型的白血病細(xì)胞增殖,下調(diào)其 CD13陽性表達(dá)率。(3) Nocturnoside B能誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡可能與Nocturnoside B損傷線粒體,促進(jìn)Caspase-3酶活化從而增

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