基于EDAG基因的抗白血病活性化合物篩選.pdf

1、目的：建立基于EDAG(紅系發(fā)育相關(guān)基因erythoid develop associated gene)轉(zhuǎn)錄活性的新的小分子化合物體外篩選模型，并利用該模型篩選小分子化合物庫，期望能快速有效尋找具有抗白血病潛能的先導(dǎo)分子。 方法：利用熒光素酶報道基因的實驗方法，將EDAG的轉(zhuǎn)錄激活活性量化，建立大規(guī)模篩選活性小分子化合物的模型，篩選小分子化合物庫(約1000個)。利用四氮唑MTS比色法，<'3>H—TdR摻入實驗，流式細胞術(shù)檢

2、測篩選到的活性化合物對高表達內(nèi)源性EDAG的白血病細胞增殖、凋亡、分化的影響；應(yīng)用信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的特異性抑制劑(U0126、CalphostinC、LY294002)檢測化合物對EDAG熒光素酶報道基因系統(tǒng)的影響，并用Western blot進一步驗證，從而對獲得的候選活性化合物的機制進行初步探討。 結(jié)果：成功構(gòu)建了pM-EDAG表達載體，建立了高通量篩選模型，應(yīng)用該模型篩選獲得候選活性化合物2G2和2F10。其中2G2抑制EDA

3、G的轉(zhuǎn)錄激活活性，對K562細胞有特異性抑制增殖、促進凋亡作用，但對其分化沒有明顯影響；2F10增強EDAG的轉(zhuǎn)錄激活活性，對K562細胞株有促巨核系分化的作用，沒有明顯抑制增殖促凋亡作用，MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑抑制劑U0126對2F10的轉(zhuǎn)錄激活效應(yīng)有特異性抑制作用。 結(jié)論：本實驗成功建立了高通量篩選對EDAG轉(zhuǎn)錄活性有影響的活性化合物模型，初步探討了活性化合物的功能及作用機制。先導(dǎo)化合物經(jīng)進一步改構(gòu)后，可能為白血病的治療提供新