白血病相關(guān)基因的功能研究.pdf

1、第一部分、Palladin參與調(diào)節(jié)紡錘體定向的功能研究
　　Palladin也稱RIG-K(Retinoic Acid Induced Gene K)是一個(gè)微絲骨架相關(guān)蛋白，我們發(fā)現(xiàn)細(xì)胞進(jìn)入有絲分裂期后，palladin蛋白在PAGE膠上的泳動(dòng)速率減慢，這提示palladin在有絲分裂期發(fā)生了某種形式的翻譯后修飾。磷酸酶實(shí)驗(yàn)表明這種蛋白條帶遷移是磷酸化引起的，且是有絲分裂期特有的。Palladin蛋白在有絲分裂期與Cdk1激酶(C

2、yclin-dependent kinase1)相互作用，Cdk1激酶抑制劑可使有絲分裂期palladin蛋白條帶恢復(fù)至分裂間期大小。這提示palladin蛋白在有絲分裂期可能是Cdk1激酶的底物。免疫熒光結(jié)果顯示，在有絲分裂期palladin蛋白定位在紡錘體上以及細(xì)胞皮層結(jié)構(gòu)上。我們利用慢病毒干擾系統(tǒng)在HeLa細(xì)胞株中將palladin敲減（knockdown），并觀察其敲減對(duì)于有絲分裂過(guò)程的影響。我們發(fā)現(xiàn)palladin的敲減可以導(dǎo)

3、致一系列有絲分裂的缺陷(mitotic defects)比如細(xì)胞的分裂指數(shù)(mitotic index)升高；分裂期的一部分細(xì)胞被阻滯在分裂中期；紡錘體傾斜(spindle tilt)；紡錘體極碎裂(spindle pole disrupted)；分裂中期染色體錯(cuò)誤排列(chromosomes misaligned)以及紡錘體的錯(cuò)誤定向(spindle misorientation)。Palladin敲減導(dǎo)致的紡錘體錯(cuò)誤定向與降低了星極

4、微管(astral microtubules)的穩(wěn)定性有關(guān)。另外，palladin的缺失在體外(in vitro)導(dǎo)致細(xì)胞分裂平面的異常(misorientation of the plane of cell division)。有絲分裂紡錘體的正確定向參與調(diào)節(jié)神經(jīng)祖細(xì)胞的對(duì)稱和不對(duì)稱分裂，與神經(jīng)發(fā)育相關(guān)。Palladin的缺失在體內(nèi)(in vivo)導(dǎo)致Palladin基因敲除小鼠胚胎神經(jīng)組細(xì)胞紡錘體的錯(cuò)誤定向。提示palladin通

5、過(guò)調(diào)節(jié)紡錘體定向可能參與調(diào)控神經(jīng)發(fā)育過(guò)程。
　　第二部分、慢病毒載體介導(dǎo)HK1基因沉默增加白血病細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性
　　為了觀察HK1基因沉默是否影響急性髓細(xì)胞白血病細(xì)胞對(duì)化療藥物阿糖胞苷(Ara C)的敏感性。我們應(yīng)用慢病毒質(zhì)粒系統(tǒng)構(gòu)建HK1基因穩(wěn)定沉默的急性髓細(xì)胞白血病細(xì)胞株。利用Western blot檢測(cè)HK1蛋白的沉默效率。CCK-8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Ara C處理空載慢病毒(陰性對(duì)照組)、shRNA-HK1(干