卷柏中單體化合物的抗輻射活性篩選及作用機(jī)理研究.pdf

1、目的:分析卷柏中單體化合物,觀察其對(duì)V79細(xì)胞和BALB/c小鼠的輻射防護(hù)作用,為探討卷柏抗輻射作用機(jī)制提供參考依據(jù)。
　　方法:1.利用CCK-8法和Gimsa染色觀察(1-8Gy)60COγ射線對(duì)V79細(xì)胞增殖和克隆形成率的影響;分別用Hoechst33258和臺(tái)盼藍(lán)染色觀察照射4、8Gy對(duì)V79細(xì)胞凋亡率和死亡率的影響;分別用活性氧檢測(cè)試劑盒和PI單染檢測(cè)照射4、8Gy對(duì)V79細(xì)胞中ROS水平和細(xì)胞周期的影響,建立V79細(xì)胞

2、輻射損傷模型,為篩選卷柏中單體化合物抗輻射活性提供參考依據(jù)。2.采用V79細(xì)胞模型篩選卷柏中單糖的抗輻射活性,通過(guò)6Gy照射BALB/c小鼠30天存活率實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證。3.采用6Gy照射AHH-1細(xì)胞模型篩選卷柏不同提取部位抗輻射活性,進(jìn)一步用8Gy照射BALB/c小鼠30天存活率實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證;高效液相色譜法法對(duì)80％乙醇部位進(jìn)行化學(xué)成分分析,對(duì)其中含量豐富的阿曼托雙黃酮采用V79細(xì)胞模型進(jìn)行抗輻射機(jī)理研究,分別觀察輻射后細(xì)胞活力、克隆形

3、成率、細(xì)胞周期,運(yùn)用6Gy照射BALB/c小鼠30天存活率實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證。
　　結(jié)果:1.通過(guò)實(shí)驗(yàn)我們發(fā)現(xiàn),60COγ射線可以劑量依賴地導(dǎo)致V79細(xì)胞死亡,隨著輻射時(shí)間延長(zhǎng)和劑量增加,細(xì)胞活力逐漸降低。4、8Gy照射后細(xì)胞腫脹,形成空泡,死亡率顯著增加;無(wú)明顯細(xì)胞核固縮、凋亡小體出現(xiàn),流式細(xì)胞儀也檢測(cè)不到亞G1峰出現(xiàn),與正常組相比,輻射后細(xì)胞中ROS水平顯著增加,發(fā)生G2期阻滯,提示V79細(xì)胞照射4、8Gy可能是通過(guò)脹亡途徑發(fā)生細(xì)胞

4、死亡的。2.卷柏中含有葡萄糖、木糖、果糖、阿拉伯糖、海藻糖等;其中木糖、果糖、阿拉伯糖在20～200μg/mL濃度范圍內(nèi)可劑量依賴地促進(jìn)照射后V79細(xì)胞增殖,在200μg/mL時(shí)可提高照射后V79細(xì)胞克隆形成率,增加S期細(xì)胞比例,緩解G2/M期阻滯,修正紊亂的細(xì)胞周期;照射前分別給予木糖100、500mg/kg可劑量依賴地提高受照射小鼠存活率達(dá)20%,30%。3.卷柏醇提總部位、80%乙醇部位可以提高6Gy照射AHH-1細(xì)胞活力,延長(zhǎng)照

5、射8Gy死亡小鼠的平均存活天數(shù)。通過(guò)對(duì)卷柏醇提物進(jìn)行化學(xué)成分分析,得到阿曼托雙黃酮含量達(dá)到13.64%;采用液相法,發(fā)現(xiàn)其主要集中在80%乙醇部位,含量為35.62%,因此對(duì)卷柏中含量豐富的阿曼托雙黃酮和酚酸類化合物香草酸進(jìn)行進(jìn)一步抗輻射機(jī)理研究,阿曼托雙黃酮5μg/mL、香草酸1μg/mL可以顯著促進(jìn)輻射后V79細(xì)胞增殖,提高克隆形成率,緩解輻射后V79細(xì)胞G2/M期阻滯,增加G1期細(xì)胞比例。另外,與6Gy30天存活率30%相比,BA