抗細(xì)胞壞死小分子化合物的篩選及抗壞死活性的分子機(jī)理研究.pdf

1、細(xì)胞壞死被證明是細(xì)胞凋亡、細(xì)胞自噬之外另一類程序性細(xì)胞死亡的一種。對(duì)細(xì)胞壞死信號(hào)通路中RIPK1、RIPK3和MLKL的鑒定及功能的研究，讓細(xì)胞壞死信號(hào)的具體轉(zhuǎn)導(dǎo)和調(diào)控分子機(jī)制被逐步揭示。雖然MLKL被證明是細(xì)胞壞死的最終執(zhí)行者，但是對(duì)于MLKL如何轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜并造成細(xì)胞膜的通透性改變，還有待進(jìn)一步研究。程序性細(xì)胞壞死在很多疾病中都有非常重要的作用，因此抗壞死藥物開(kāi)發(fā)也是目前的一個(gè)重要研究方向。
　　試圖通過(guò)本次抗細(xì)胞壞死小分子抑

2、制劑的篩選，一方面結(jié)合化學(xué)生物學(xué)的研究方法對(duì)小分子抑制劑的靶標(biāo)進(jìn)行鑒定，從而對(duì)細(xì)胞壞死的分子機(jī)理作進(jìn)一步深入探索;另一方面由于目前已知的抗壞死小分子在作為藥物開(kāi)發(fā)前體還存在多方面的限制因素，新型苗頭化合物的發(fā)現(xiàn)有希望為新的抗壞死藥物設(shè)計(jì)提供思路。
　　以TNF-α、Smac mimetic和Z-VAD.fmk誘導(dǎo)程序性細(xì)胞壞死的篩選方法，對(duì)含31萬(wàn)化合物的小分子庫(kù)進(jìn)行抗細(xì)胞壞死活性篩選，最終得到約180個(gè)活性苗頭化合物。結(jié)合三維結(jié)

3、構(gòu)分類、不同細(xì)胞死亡活性比較及細(xì)胞壞死關(guān)鍵標(biāo)志物檢測(cè)等方法，對(duì)苗頭化合物在細(xì)胞壞死信號(hào)通路中的作用節(jié)點(diǎn)及方式進(jìn)行了初步分析和分類，得到類Nec-1、類NSA及新型抗壞死分子等多種類別化合物。在mRIPK3聚合誘導(dǎo)細(xì)胞壞死、Thermal shift assay等其他篩選方法中還得到一類通過(guò)抑制RIPK3激酶活性的抗壞死活性化合物，
　　根據(jù)篩選目的，最終對(duì)C236N12和S37J14兩個(gè)苗頭化合物進(jìn)行了抗壞死分子機(jī)理的深入研究。通

4、過(guò)生物化學(xué)和化學(xué)生物學(xué)等方法，最終確定這兩個(gè)小分子都以MLKL作為作用靶標(biāo)蛋白，通過(guò)共價(jià)結(jié)合MLKL的Cys86位點(diǎn)對(duì)MLKL進(jìn)行修飾，阻斷其形成多聚體及向膜結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)移，從而起到抑制細(xì)胞壞死的作用。在研究的過(guò)程中，開(kāi)發(fā)出了通過(guò)誘導(dǎo)RIPK3或MLKL形成聚合體，而不依賴上游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程，直接激活細(xì)胞壞死的壞死誘導(dǎo)系統(tǒng)。該系統(tǒng)對(duì)于抗壞死小分子藥物的篩選、活性分子作用位點(diǎn)判斷及細(xì)胞壞死信號(hào)激活機(jī)制的研究都有非常重要的作用。通過(guò)對(duì)C236N1