新型HDAC抑制劑——苯達莫司汀化合物Nl-101的抗白血病作用及機制研究.pdf

1、研究目的:開發(fā)具有生物活性高、毒性低等特點的新藥一直是腫瘤治療研究領域的熱點，其中分子合成藥物由于能夠克服傳統(tǒng)化療藥物的缺陷而備受關注。NL-101是一種連接組蛋白去乙?；敢种苿㏒AHA以及烷化劑苯達莫司汀的活性基團而合成的化合物。本文探討這種化合物在體外和體內對于白血病細胞的殺傷作用以及相關分子機制。
　　研究方法:采用MTT法檢測NL-101、SAHA和苯達莫司汀對多種白血病細胞系增殖能力的影響，用SPSS軟件計算半數抑制劑

2、量(IC50)，用CompuSyn軟件計算SAHA和苯達莫司汀的藥物聯合指數(CI);用流式細胞術分析藥物處理后細胞的周期和凋亡變化;Western blot檢測藥物處理后組蛋白H3乙?；剑约暗鞍椎蛲龊虳NA損傷相關蛋白包括γ-H2AX、PARP、caspase-3、Bax、Bcl-2和Bcl-xL的表達;Ficoll法分離病人原代細胞，瑞氏染色觀察細胞經藥物處理后的形態(tài)改變。體內實驗部分，通過逆轉錄病毒感染構建共表達AML1-E

3、TO和C-KIT突變的移植白血病小鼠模型，給予NL-101、苯達莫司汀和SAHA注射治療，動態(tài)監(jiān)測小鼠體重以及體內白血病細胞浸潤情況，記錄各組小鼠生存期。
　　研究結果:在體外實驗中:(1)苯達莫司汀和SAHA在白血病細胞中具有協同作用。(2) NL-101對多種白血病細胞系的生長有明顯的抑制作用，其中Kasumi-1和NB4細胞的敏感性最為顯著;NL-101對正常細胞系的作用較小，顯示出對腫瘤細胞作用的選擇性;NL-101的抗增

4、殖能力顯著高于苯達莫司汀，與SAHA沒有顯著差異。(3) NL-101導致白血病細胞周期阻滯于S期，以及顯著的細胞凋亡。(4)NL-101的細胞毒性作用在分子水平上表現為激活依賴caspase-3的凋亡通路以及Bcl-2家族促凋亡蛋白;NL-101能增加DNA損傷標志蛋白γ-H2AX和乙?；M蛋白H3的表達。(5) NL-101能誘導急性髓系白血病患者的原代細胞發(fā)生DNA損傷和細胞凋亡。在體內實驗中:(1)成功建立共表達AML1-ETO

5、和C-KIT突變的移植白血病小鼠模型，造血器官中有大量原始細胞(c-Kit+、Gr1-、CD11b-)浸潤。(2)NL-101能抑制t(8;21)白血病細胞的增殖和浸潤，顯著延長白血病小鼠的生存期，具有比苯達莫司汀和SAHA更強的抗白血病活性。(3) NL-101對小鼠體重沒有顯著影響，小鼠的耐受性良好。
　　研究結論:由SAHA和苯達莫司汀的活性基團合成的新型藥物NL-101，在體內及體外實驗中均具有抑制白血病細胞增殖以及誘導細