Myocilin蛋白對原發(fā)性開角型青光眼小梁網(wǎng)細(xì)胞FN表達及細(xì)胞遷移與粘附的影響.pdf

1、目的：建立原發(fā)性開角型青光眼（Primary open angle glaucoma,POAG）小梁網(wǎng)細(xì)胞體外原代培養(yǎng)體系；分析不同濃度重組myocilin蛋白對POAG小梁網(wǎng)細(xì)胞纖維連接蛋白(fibronectin，F(xiàn)N)表達及對細(xì)胞遷移、粘附功能的影響，探討myocilin蛋白與原發(fā)性開角型青光眼發(fā)病的關(guān)系。
　　方法：運用組織塊培養(yǎng)法，進行體外細(xì)胞原代和傳代培養(yǎng)，取傳3代的小梁網(wǎng)細(xì)胞分別加入含重組myocilin蛋白終濃度為

2、0 ug/ml（對照組）、0.5 ug/ml、1 ug/ml、1.5 ug/ml、2ug/ml、2.5ug/ml的無血清培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)24小時后，運用Western blo t、Elisa法分別檢測小梁網(wǎng)細(xì)胞內(nèi)以及細(xì)胞培養(yǎng)液中FN的表達水平；并運用Transwell小室法、CCK-8法檢測myocilin蛋白對所培養(yǎng)傳3代POAG小梁網(wǎng)細(xì)胞遷移、粘附的影響。
　　結(jié)果：1、組織塊長出的細(xì)胞經(jīng)倒置顯微鏡觀察、免疫細(xì)胞化學(xué)抗原表達檢

3、測，證實體外培養(yǎng)細(xì)胞為POAG小梁網(wǎng)細(xì)胞；2、Western blot檢測結(jié)果:FN/β-actin比值分別為33.4±1.0、28.9±0.8、21.6±0.9、15.9±1.1、11.9±0.8。0.5 ug/ml組與對照組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.09，P>0.05）；1.0 ug/ml、1.5 ug/ml、2 ug/ml、2.5 ug/ml組與對照組的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P均為0.00，P<0.05)。3、Elisa法檢測各組

4、細(xì)胞培養(yǎng)液中 FN濃度為：0.4654±0.0039 ug/ml、0.4596±0.0032ug/ml、0.4216±0.0037 ug/ml、0.4214±0.0039 ug/ml、0.4043±0.0039 ug/ml、0.3806±0.0071ug/ml。0.5 ug/ml組與對照組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.12， P>0.05）；1.0 ug/ml、1.5 ug/ml、2 ug/ml、2.5 ug/ml組與對照組的差異有統(tǒng)計

5、學(xué)意義(P均為0.00，P<0.05)。4、Tra ns we ll小室法檢測結(jié)果顯示：對照組和實驗組細(xì)胞數(shù)分別為16.40±4.0373，8.60±2.0736，實驗組細(xì)胞遷移數(shù)較對照組少，實驗組與對照組的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.005，P<0.05）。5、運用CCK-8法檢測各組細(xì)胞吸光度值的均值分別為1.9814±0.1624、1.8848±0.0267、1.4895±0.0916、1.4120±0.1087、1.3392±0.