五株神經(jīng)致幻型毒菌的初步鑒定及其活性成分研究.pdf

1、神經(jīng)致幻型毒菌又稱迷幻菇，這是一類在其子實(shí)體或菌絲體中含有致幻型毒素活性色胺類物質(zhì)，能夠引起人或者其他動(dòng)物致幻型中毒的大型真菌。活性色胺類物質(zhì)的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是其分子結(jié)構(gòu)中含有吲哚環(huán)和二甲基氨基基團(tuán)，包括裸蓋菇素和脫磷裸蓋菇素等。神經(jīng)致幻型毒菌在世界各地廣泛分布，種類很多，包括裸蓋菇屬、花褶傘屬、裸傘屬、球蓋菇屬、絲蓋傘屬、錐蓋傘屬、鵝膏屬、垂幕菇屬、光柄菇屬、田頭菇屬等屬的一些種類。
　　 神經(jīng)致幻型毒菌及其所含有的毒素可以引起人或

2、者其他動(dòng)物神經(jīng)興奮，可使心跳加快、呼吸頻率增加、收縮壓上升、體溫升高、臉面潮紅、出汗、發(fā)冷、瞳孔放大等癥狀；引起異常精神狀態(tài)，有陌生感、思維比較困難、興奮以及五官和肢體感覺(jué)異常，甚至出現(xiàn)幻覺(jué)。在一些西方國(guó)家，有些年輕人因?yàn)闉E用迷幻菇或是其毒性成分，給社會(huì)帶來(lái)了一定的危害，使這類毒菌的吸食和研究遭到了很大的限制。但是這類毒菌或其所含有的活性成分在治療精神疾病、恐懼癥、神經(jīng)失調(diào)、戒除煙酒、頭痛和研究大腦奧秘等方面具有積極作用，所以西方國(guó)家學(xué)

3、者們并沒(méi)有間斷對(duì)它們的研究。研究的主要內(nèi)容包括致幻型毒菌的生境調(diào)查和種的鑒定，活性成分的提取、檢測(cè)、分離純化、結(jié)構(gòu)鑒定，代謝與分泌、合成以及在精神疾病方面的診斷和治療等。而我國(guó)對(duì)這一領(lǐng)域的研究相對(duì)落后，僅進(jìn)行了簡(jiǎn)單的生境調(diào)查和毒菌生物學(xué)特性研究，對(duì)其毒素成分的合成以及應(yīng)用方面的研究尚未進(jìn)行。
　　 本文以采集于不同地點(diǎn)的五個(gè)菌株為實(shí)驗(yàn)材料。利用光鏡技術(shù)、分子生物學(xué)技術(shù)、高效液相色譜技術(shù)、質(zhì)譜技術(shù)、核磁共振技術(shù)，對(duì)這五個(gè)菌株進(jìn)行了

4、分類鑒定和活性成分分析。主要內(nèi)容包括：這五個(gè)菌株的生態(tài)學(xué)和組織學(xué)特征，ITS序列測(cè)定，菌種分離和菌絲培養(yǎng)條件的優(yōu)化選擇，毒素的試紙及TLC檢測(cè)，對(duì)昆明小白鼠的毒性研究，活性成分的HPLC分離分析和結(jié)構(gòu)鑒定，研究結(jié)果如下：
　　 1.測(cè)定了這五個(gè)菌株的18SrDNA(部分)-ITS1-5.8SrDNA-ITS2-28SrDNA(部分)序列，并與基因庫(kù)中的序列進(jìn)行比對(duì)分析。表明ITS區(qū)DNA序列分析可將菌株鑒定至屬。其中443-菌株

5、、518-菌株和寧鄉(xiāng)采集菌株為裸蓋菇屬種類，581-菌株和汨羅采集菌株為盔孢傘屬種類。但要鑒定至種，還需進(jìn)一步進(jìn)行多相分類。
　　 2.通過(guò)光學(xué)顯微鏡、熒光顯微鏡對(duì)這五個(gè)菌株進(jìn)行形態(tài)組織學(xué)方面的觀察。443、518和寧鄉(xiāng)菌株形態(tài)結(jié)構(gòu)一樣，擔(dān)子棒狀，四孢，孢子橢圓形，褐色，萌發(fā)孔明顯，褶緣囊狀體發(fā)達(dá)，雙核菌絲，鎖狀聯(lián)合常見(jiàn)。根據(jù)宏觀形態(tài)、顯微特征以及ITS序列可以確定443-菌株、518-菌株和寧鄉(xiāng)菌株為裸蓋傘屬蘇湄島菇(Psil

6、ocybe samuiensis)。
　　 3.通過(guò)組織分離獲得了蘇湄島菇的菌種。并從基本培養(yǎng)基、麥芽汁培養(yǎng)基和牛糞汁培養(yǎng)基這三種培養(yǎng)基中篩選出了液體培養(yǎng)菌絲體最優(yōu)培養(yǎng)基為牛糞汁培養(yǎng)基。
　　 4.通過(guò)試紙的初步檢測(cè)和TLC法從粗毒提取液中分離得到紫褐色斑點(diǎn)(Rf=0.16)，初步證明含有裸蓋菇素，說(shuō)明這五個(gè)菌株均屬于神經(jīng)致幻型毒菌。利用小白鼠腹腔注射，測(cè)定了蘇湄島菇子實(shí)體粗毒液的毒性，表明該毒菌可以引起小鼠興奮，中毒癥