一株溶血栓細(xì)菌的鑒定及其溶栓活性成分的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、心腦血管疾病已成為對人類健康的最大威脅之一。近幾十年來,該病的發(fā)病率逐漸升高,對溶栓藥物的需求大增,因此研制溶栓藥具有十分重要的意義。本研究對一株來自青藏高原海拔4300 m的河流泥土的纖溶酶高產(chǎn)菌株DR-929進行鑒定,并對該細(xì)菌分泌的纖溶酶進行分離純化和探索其在動物體內(nèi)的抗栓、溶栓效果。 (1)通過生理生化特征和16S rRNA基因序列分析對菌株DR-929進行了鑒定。生理生化試驗結(jié)果表明,菌株DR-929與嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌

2、具有高度相似性,其16S rRNA基因序列分析結(jié)果顯示,菌株DR-929的16S rRNA基因序列與嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌具有同源性,二者在進化分析中被聚為一類,可信度達到99%。另外,該菌并不產(chǎn)生溶血素,而且其普通肉湯培養(yǎng)物對小鼠也沒有毒性。 (2)菌株DR-929分泌纖溶酶的液體發(fā)酵優(yōu)化條件為:可溶性淀粉2.0%,黃豆粉1.0%,NaCl 1.0%,CaCl2 0.02%,MgSO4 0.05%,種齡36 h,發(fā)酵時間4 d,初始

3、pH8.0或8.0,溫度25℃,裝樣量30 mL,接種量5%或6%,經(jīng)優(yōu)化發(fā)酵條件后活力達188.66IU/mL。 (3)經(jīng)硫酸銨鹽析、疏水層析、Q FF陰離子交換層析以及G-75葡聚糖凝膠過濾層析等步驟,分離純化得到菌株DR-929分泌的纖溶酶,其在SDS-PAGE凝膠電泳膠上呈單一均勻的條帶,純化倍數(shù)為271.5倍,回收率為24.5%,活性為7003.8 IU/mg(以尿激酶為標(biāo)準(zhǔn))。 (4)菌株DR-929分泌的纖

4、溶酶的分子量為28300 Da,最適反應(yīng)溫度和最適反應(yīng)pH分別為45℃和pH 8.0,其在45℃溫度下穩(wěn)定,并且在pH 5.0~8.0范圍內(nèi)也比較穩(wěn)定。另外,該纖溶酶是一種金屬蛋白酶,活性能被EDTA完全抑制,而PMSF不影響其活性。該酶也屬于纖維蛋白溶解酶類,其不具有纖維蛋白溶酶原激活劑的功能。 (5)采用小鼠抗凝血模型、大鼠靜脈血栓形成模型和兔頸動脈血栓模型探索了菌株DR-929分泌的纖溶酶(FA-I)分別經(jīng)口服、腸道給藥和

5、靜脈注射后在體內(nèi)的藥效。結(jié)果顯示:FA—I明顯延長凝血時間(CT)、凝血酶原時間(PT)、活化的部分凝血活酶時間(APTT)和凝血酶時間(TT)(P<0.05或P<0.01),顯著降低優(yōu)球蛋白溶解時間(ELT)和纖維蛋白原(FIG)含量(P<0.01),并且能改善血液流變狀態(tài)。表明FA-I無論靜脈注射還是口服均能達到抗栓、溶栓效果。 綜上所述,本研究中菌株DR-929分泌的纖溶酶可能是一種新型的纖維蛋白溶解酶,其體內(nèi)溶栓效果表明

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