瘦素受體及ssp411基因的生殖生物學功能研究.pdf

1、不孕不育作為一個普遍發(fā)生的疾病困擾著世界上約15％的夫婦，其中男方因素引起的不育約占50％。引起男性生育力下降的原因有很多，包括:生殖道感染，內分泌紊亂，基因缺陷，免疫因素以及各種不良環(huán)境因素等，但是高達60-75％的患者找不到原因（特發(fā)性男性不育）。隨著遺傳機制研究的不斷深入及診斷技術的不斷改進，更多的男性不育病因被找到。本研究主要從瘦素受體基因突變導致雄性不育的小鼠模型入手，探討瘦素受體突變對雄性生殖功能的影響;以及睪丸特異表達的新

2、基因ssp411在生育和不育男性患者精子中的表達變化，探討ssp411基因與男性不育的相關性。對男性/雄性生殖功能有影響的基因突變及缺失表達的研究有望為男性不育的臨床診斷和治療提供新的依據(jù)。
　　瘦素受體介導瘦素通路中一系列蛋白的表達從而調節(jié)整個機體的能量代謝、免疫反應、血管生成以及生殖功能。Y123F小鼠模型是將瘦素受體蛋白的3個關鍵酪氨酸位點突變?yōu)楸奖彼?，結果突變后的小鼠表現(xiàn)為攝食過量、肥胖、脂肪肝和雄性不育。我們從Y123

3、F(-/-)雄性小鼠附睪尾獲取成熟精子，并與C57BL/6卵母細胞通過ICSI受精，體外培養(yǎng)至2細胞后移植到代孕ICR母鼠輸卵管，產生雜合子F1代，并通過F1代雜合子自交獲得不同基因型的F2代。結果通過ICSI技術我們獲得了31只F1代Y123F小鼠，其中20只存活，通過F1代自交我們得到了不同基因型的F2代小鼠。為研究Y123F(-/-)雄性小鼠的生殖功能，我們觀察其睪丸形態(tài)，附睪精子活動率，精子DNA損傷，以及精子體外受精能力。結果

4、發(fā)現(xiàn):Y123F(-/-)雄性睪丸和附睪均顯著小于野生型小鼠，盡管睪丸組織形態(tài)基本正常，但附睪精子則表現(xiàn)為活動率低和畸形率高， IVF受精率明顯低于正常和雜合子精子。我們進一步用深度測序的方法比較了Y123F(-/-)小鼠與野生型小鼠精子的microRNA表達譜，發(fā)現(xiàn)150個在精子中高豐度表達的microRNA中，超過40個miRNA在Y123F(-/-)小鼠精子中存在差異表達，這些miRNA是否與瘦素受體突變相關還有待進一步驗證。

5、r>　　ssp411基因是本實驗室在大鼠睪丸中首次發(fā)現(xiàn)，其mRNA僅在大鼠睪丸生精細胞發(fā)生減數(shù)分裂后表達。而人ssp411基因則存在多個轉錄異構體，且在不同組織中異構體的表達顯著差異，其中異構體4和異構體5僅在睪丸和精子細胞中表達。為研究人SSP411的功能，我們構建了ssp411全基因表達質粒，細胞轉染后的Western blot分析發(fā)現(xiàn)，僅ssp411異構體5才表達SSP411蛋白。我們通過RT-PCR方法檢測了29例不育癥患者和正