人類新基因BNIPL生物學功能的初步研究.pdf

1、復旦大學博士學位論文人類新基因BNIPL生物學功能的初步研究姓名：沈利申請學位級別：博士專業(yè)：遺傳學指導教師：李育陽20031120復旦大學博士學位論文 中文摘要M I F ) ，生長因子( g r o w t h f a c t o r , e r v l ( S ．c e r e v i s i a e ) - l i k e ，G F E R ) ，核苷二磷酸激酶B ( n m 2 3 一H 2 ／N D P ( N u c l

2、e o s i d e d i p h o s p h a t e ) k i n a s eB ) 和F K 5 0 6 結(jié)合蛋白3 8 ( F K 5 0 6b i n d i n g p r o t e i n 3 8 ，F(xiàn) K B P 3 8 ) 。利用G S T P u l l d o w n 和C o - i m m u n o p r e c i p i t a t e 實驗分別在體外和體內(nèi)驗證了B N I P L 可以分

3、別和M I F 、G F E R 、r i m 2 3 ．H 2 和F K B P 3 9發(fā)生蛋白質(zhì)的相互結(jié)合。我們通過克隆集落形成實驗和對細胞生長曲線的測定，研究發(fā)現(xiàn)B N I P L 的過量表達能夠抑制腫瘤細胞的生長，并且通過流式細胞術檢測細胞膜表面磷脂酰絲氨酸的外翻變化，發(fā)現(xiàn)B N I P L 具有促進腫瘤細胞凋亡的功能。因為B N I P L 與其相互作用的蛋白F K B P 3 8 分別可以與B c l ．2 結(jié)合，也就是說三

4、種蛋白可以兩兩之間發(fā)生蛋白質(zhì)的相互結(jié)合，分析認為B N I P L 可能是參與了F K B P 3 8 ．B c l ．2 復合物的構(gòu)成或者復合物定位的調(diào)控，抑制B c l ．2 的功能，從而促進細胞凋亡。為了進一步研究M I F 、n m 2 3 H 2 與B N I P L 的相互作用對細胞生長的影響，以及它們相互作用的生物學意義，我們利用“ l e t ．o n 基因表達系統(tǒng)構(gòu)建了可調(diào)控表達B N I P L ，持續(xù)表達M I F

5、 或n m 2 3 一I - 1 2 的H e p 3 B 穩(wěn)定細胞株。利用流式細胞術來研究B N I P L 及其相互作用的蛋白M I F 和n m 2 3 - H 2 分別表達和共同表達對細胞周期分布和細胞凋亡的影響。實驗結(jié)果表明，B N I P L 和n m 2 3 一H 2 分別具有促進細胞凋亡的功能，兩者處于B e l - 2 上游的兩條不同的調(diào)控途徑中，當B N I P L和n m 2 3 ．H 2 共同表達并發(fā)生蛋白質(zhì)相互

6、作用時，兩者相互抑制，表現(xiàn)為抑制細胞凋亡。B N I P L 參與細胞增殖的途徑是與M I F 、G F E R 發(fā)生蛋白質(zhì)相互作用。我們主要研究了B N I P L 與M I F 的蛋白質(zhì)相互結(jié)合，認為B N I P L 對細胞增殖的抑制作用，主要是抑制了M I F 的促細胞生長的功能實現(xiàn)的；反之，M I F 也可以通過與B N I P L 結(jié)合抑制由B N I P L 誘導的細胞凋亡的產(chǎn)生。本文的研究結(jié)果為進一步確定B N I P