GSTθ在腫瘤中生物學(xué)功能的初步研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)的目的是：了解增加GSTθ表達(dá)水平對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，細(xì)胞周期和放射敏感性的影響。 我們選取兩種腫瘤細(xì)胞：人類宮頸癌HeLa細(xì)胞和結(jié)腸癌HCT116細(xì)胞。通過(guò)脂質(zhì)體Lipofectamine將’pcDNA3-GSTθ真核質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染到腫瘤細(xì)胞中，獲得GST0高表達(dá)的HeLa及HCT116細(xì)胞；采用RT-PCR和Western blot蛋白免疫印跡法分別檢測(cè)GST0 mRNA和蛋白的表達(dá)水平；采用細(xì)胞記數(shù)和MTT法測(cè)定細(xì)胞的生長(zhǎng)

2、；MTT法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)對(duì)血清濃度的依賴性；采用流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期的變化；劃痕實(shí)驗(yàn)觀察GST0對(duì)細(xì)胞侵襲性的作用；采用集落形成法觀察GST0對(duì)輻射敏感性的影響。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果總結(jié)如下：(1)人類宮頸癌HeLa細(xì)胞及HCT116細(xì)胞中GST0基因缺失，檢測(cè)不出其表達(dá)。(2)轉(zhuǎn)染GST0基因后兩種細(xì)胞的生長(zhǎng)均受到抑制，且HCT116細(xì)胞的抑制作用更明顯。(3)GST0高表達(dá)使HCT116細(xì)胞的生長(zhǎng)對(duì)血清的依賴性增強(qiáng)，但這種作用在HeL

3、a細(xì)胞中未觀察到。(4)GST0基因轉(zhuǎn)染后Hela細(xì)胞的侵襲性下降。(5)HeLa細(xì)胞及HCT116細(xì)胞輻射后細(xì)胞存活率在轉(zhuǎn)染了GST0基因后明顯下降，這可能與流式細(xì)胞顯示的G2/M期阻滯有關(guān)。(6)GST0高水平表達(dá)降低了DNA損傷的修復(fù)蛋白XRCC4，DNA ligaseIV和Ku70表達(dá)水平，從而增加了細(xì)胞的放射敏感性。 這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：GSTθ基因可以抑制兩種腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)；有可能降低結(jié)腸癌細(xì)胞的惡性程度及降低宮頸癌的