銀屑病患者皮損和外周血中漿細(xì)胞樣樹(shù)突狀細(xì)胞，TLR9、IRF-7、IFN-αmRNA表達(dá)研究.pdf

1、第一部分漿細(xì)胞樣樹(shù)突狀細(xì)胞在銀屑病患者皮損中募集 目的: 探討漿細(xì)胞樣樹(shù)突狀細(xì)胞（Plasmacytoid Dendritic Cell，pDC）在銀屑病患者皮損和正常皮膚中的聚集及其意義。 方法: 收集本院皮膚科門(mén)診或病房經(jīng)臨床與病理檢查后診斷明確的尋常型進(jìn)行期銀屑病患者皮損22例，15例整形外科患者的皮膚做正常對(duì)照，液氮快速冷凍后－70℃保存?zhèn)溆?。每例皮損做冰凍切片三張，采用免疫組織化學(xué)S-P法，檢測(cè)pDC特異性抗原

2、CD123，以胞膜或胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒物質(zhì)，且著色強(qiáng)度明顯高于背景非特異性染色為準(zhǔn)記數(shù)，取光學(xué)顯微鏡下每平方毫米視野（10×40）中的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，即在×10目鏡×40物鏡下，隨機(jī)選擇5個(gè)視野，其中每平方毫米內(nèi)的平均陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)作為記數(shù)標(biāo)準(zhǔn)，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。 結(jié)果: 在22例銀屑病皮損中，CD123＋的pDC在真皮乳頭、表皮基底層均有浸潤(rùn)，呈棕黃色顆粒，具體表達(dá)結(jié)果是10±2.1，15例正常對(duì)照皮膚中CD123沒(méi)有出現(xiàn)或零星出現(xiàn)

3、，具體結(jié)果是0.4±0.6，在統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異有顯著性（P<0.01）。 結(jié)論: CD123陽(yáng)性的pDC在銀屑病患者皮損中浸潤(rùn)明顯增加，可能與銀屑病的發(fā)病相關(guān)。 第二部分、漿細(xì)胞樣樹(shù)突狀細(xì)胞在銀屑病患者外周血中的比例。 目的：探討CD123+BDCA-2+漿細(xì)胞樣樹(shù)突狀細(xì)胞（plasmacytoid dendritic cell，pDC）在銀屑病患者和正常人外周血中的比例及其意義。 方法：收集本院皮膚科門(mén)診或

4、病房經(jīng)臨床與病理檢查后診斷明確的22例尋常性進(jìn)行期銀屑病患者；正常人對(duì)照15例，均源自本院整形外科。取患者以及正常人對(duì)照組肘靜脈血2ml，肝素抗凝（20μl/ml），置于5ml專(zhuān)用試管中。采用流式細(xì)胞分析術(shù)檢測(cè)22例銀屑病患者外周血CD123+BDCA-2+pDC的比例，15例整形外科手術(shù)病人的外周血作正常對(duì)照。 結(jié)果：流式細(xì)胞術(shù)顯示尋常型銀屑病患者外周血中，CD123+BDCA-2+pDC占外周血單個(gè)核細(xì)胞的比例是（0.17±

5、0.07）％，正常對(duì)照外周血中CD123+BDCA-2+pDC占外周血單個(gè)核細(xì)胞的比例是（0.33±0.20）％。同正常對(duì)照相比，pDC在銀屑病患者外周血中下降，在統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異有顯著性（P<0.01）。 結(jié)論：CD123+BDCA-2+pDC在銀屑病皮膚中聚集可能起因于pDC活化從血中進(jìn)入皮膚重新分布。 第三部分TLR9及其mRNA 在銀屑病患者皮損中的表達(dá) 目的：探討TLR9及其mRNA在銀屑病患者皮損和正常皮

6、膚中的表達(dá)及其意義。 方法：收集本院皮膚科門(mén)診或病房經(jīng)臨床與病理檢查后診斷明確的尋常型進(jìn)行期銀屑病患者皮損22例，15例整形外科患者的皮膚做正常對(duì)照，液氮快速冷凍后－70℃保存?zhèn)溆?。免疫組織化學(xué)：組織甲醛固定后，石蠟包埋，每例皮損做石蠟切片三張，采用免疫組織化學(xué)S-P法，檢測(cè)TLR9的表達(dá)，以胞膜或胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒物質(zhì)，且著色強(qiáng)度明顯高于背景非特異性染色為準(zhǔn)記數(shù)，取光學(xué)顯微鏡下每平方毫米視野（10×40）中的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，即在×

7、10目鏡×40物鏡下，隨機(jī)選擇5個(gè)視野，其中每平方毫米內(nèi)的平均陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)作為記數(shù)標(biāo)準(zhǔn)，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。RT-PCR：取皮膚標(biāo)本50mg加1mlTrizol按說(shuō)明書(shū)抽提RNA并逆轉(zhuǎn)錄。合成的cDNA于－20℃保存或直接行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物于于1.5％瓊脂糖凝膠穩(wěn)壓電泳，紫外燈下觀(guān)察結(jié)果并攝影。 結(jié)果：在22例銀屑病皮損中，TLR9陽(yáng)性細(xì)胞在真皮上部表達(dá)，呈棕黃色顆粒，具體表達(dá)結(jié)果是14±2.2，15例正常對(duì)照皮膚中未檢測(cè)到T

8、LR9的陽(yáng)性表達(dá)，在統(tǒng)計(jì)學(xué)上，差異有顯著性（P<0.01）。銀屑病皮損及正常人皮膚中均有TLR9mRNA的表達(dá)。在銀屑病皮損TLR9mRNA的表達(dá)水平為1.2818±0.0902，較正常人對(duì)照組（0.8681±0.0302）明顯增高，在統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異有顯著性（P<0.01）。 結(jié)論：TLR9及其mRNA在銀屑病患者皮損中的表達(dá)明顯增加，可能與銀屑病發(fā)病相關(guān)。 第四部分、IRF-7mRNA、IFN-αmRNA在銀屑病患者皮損

9、中的表達(dá)。 目的：探討銀屑病患者皮損中干擾素調(diào)節(jié)因子7（Interferon regulate factor,IRF-7）、干擾素α（Interferon-a,IFN-α）mRNA的表達(dá)及其意義。 方法：收集本院皮膚科門(mén)診或病房經(jīng)臨床與病理檢查后診斷明確的尋常型進(jìn)行期銀屑病患者皮損22例，15例整形外科患者的皮膚做正常對(duì)照，液氮快速冷凍后－70℃保存?zhèn)溆?。采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）方法檢測(cè)22例銀屑病患者皮

10、損和15例正常對(duì)照中IRF-7、IFN-αmRNA的表達(dá)。 結(jié)果：尋常型銀屑病患者皮損中IRF-7mRNA的相對(duì)量為0.9817±0.0503，較正常人對(duì)照組（0.6343±0.0439）明顯增高，在統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異有顯著性（P<0.001）。尋常型銀屑病患者皮損中IFN-αmRNA的相對(duì)量為0.8524±0.0465，正常人皮膚組織中為0.8324±0.0244，在統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異無(wú)顯著性（P＞0.05）。 結(jié)論：在銀屑病皮損