西維來司鈉對(duì)大鼠重癥急性胰腺炎后急性胰肝保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分西維來司鈉對(duì)大鼠重癥急性胰腺炎的急性胰腺損傷的保護(hù)作用的研究
　　 目的：通過檢測(cè)重癥急性胰腺炎(SAP)大鼠血清中中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶(NE)、白介素-6(IL-6)的含量、血中血小板數(shù)目和紅細(xì)胞壓積(HCT)的含量及胰腺組織病理學(xué)觀察，研究西維來司鈉(Sivelestat)對(duì)大鼠SAP模型中急性胰腺損傷的治療作用。
　　 方法：SD大鼠54只，雌雄不限，體重250～280g(河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)，編

2、號(hào)904231，隨機(jī)分為3組，其中A組為空白對(duì)照組(n=18)，B組為模型組(n=18)，C組為藥物治療組(n=18)。每實(shí)驗(yàn)組又分3個(gè)亞組，為3h、6h、12h亞組，各6只。本實(shí)驗(yàn)重癥胰腺炎模型采用經(jīng)十二指腸乳頭逆行膽胰管注射3.5％牛磺膽酸鈉的方法制備大鼠SAP模型；藥物治療組在制備SAP大鼠模型前進(jìn)行右側(cè)頸靜脈穿刺置管，待大鼠SAP模型成功后使用微量泵持續(xù)靜脈輸入西維來司鈉(5mg/100g/h)；空白對(duì)照組開腹，輕翻動(dòng)胰腺，對(duì)照

3、組和模型組經(jīng)頸靜脈持續(xù)靜注與治療組等量的生理鹽水(0.5ml/100g/h)。在模型制備完成后3h、6h和12h時(shí)間點(diǎn)，各組分別處死6只大鼠。切取胰腺，觀察胰腺大體標(biāo)本，留取部分胰腺組織制備組織切片行HE染色，進(jìn)行組織學(xué)觀察及組織病理學(xué)評(píng)分；計(jì)算胰腺組織的濕/干重比；用紗布法計(jì)算腹腔積液重量；留取血清應(yīng)用自動(dòng)生化分析儀測(cè)血清淀粉酶含量、血小板數(shù)目及HCT的含量，應(yīng)用ELISA方法測(cè)定血清中NE、IL-6的含量。用比色法測(cè)定胰腺組織中髓過

4、氧化物酶(MPO)含量。
　　 結(jié)果：
　　 1.胰腺組織：
　　 1.1.觀察：(1)大體觀：A組為正常胰腺組織，未見腹水；B組大鼠腹腔內(nèi)可見大量混濁血性腹水，胃腸擴(kuò)張明顯，大網(wǎng)膜、腸系膜可見皂化斑，胰腺腫脹、灶狀或片狀出血壞死灶；C組見少量腹水，胰腺腫脹。(2)光鏡下：B組見胰腺腺泡細(xì)胞腫脹壞死，融合成大片狀，間質(zhì)有出血、水腫并有中性粒細(xì)胞及單核細(xì)胞明顯浸潤(rùn)，可見大片壞死灶；C組見少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，可見點(diǎn)狀壞

5、死灶。
　　 1.2.組織病理學(xué)評(píng)分結(jié)果：(1)胰腺：B組隨時(shí)間延長(zhǎng)損傷程度加重，各時(shí)間點(diǎn)間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，與A組相比在各時(shí)間點(diǎn)損傷程度均加重，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；C組胰腺損傷的組織病理學(xué)評(píng)分在各時(shí)間點(diǎn)與B組相比均降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 1.3.胰腺濕/干重比測(cè)定結(jié)果：(1)胰腺濕/干重比：B組各時(shí)間點(diǎn)較A組同時(shí)間點(diǎn)值升高，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)

6、；C組6h、12h時(shí)間點(diǎn)較B組同時(shí)間點(diǎn)值降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，3h時(shí)間點(diǎn)與B組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 2.腹腔積液重量比較：A組未見腹腔積液；B組各時(shí)間點(diǎn)腹腔積液重量隨時(shí)間延長(zhǎng)而增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；C組各時(shí)間點(diǎn)較B組同時(shí)間點(diǎn)腹腔積液重量減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 3.血常規(guī)的測(cè)定結(jié)果：(1)血小板含量：B組血清血小板含量各時(shí)間點(diǎn)較A組均升高

7、，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；B組血清血小板含量各時(shí)間點(diǎn)間隨時(shí)間延長(zhǎng)而增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；C組血清血小板各時(shí)間點(diǎn)的含量較B組，差異不顯著性，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。(2)HCT含量：B組血清中HCT含量在各時(shí)間點(diǎn)較A組均明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；B組血清中HCT含量在各時(shí)間點(diǎn)間隨時(shí)間延長(zhǎng)而增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；C組各時(shí)間點(diǎn)的HCT含量較B組同時(shí)間點(diǎn)無顯著差異，

8、具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 4.血清淀粉酶測(cè)定結(jié)果：B組各時(shí)間點(diǎn)血清淀粉酶值較A組有明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，C組3h、6h時(shí)間點(diǎn)血清淀粉酶值與B組同時(shí)間點(diǎn)的值比較，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，12h時(shí)間點(diǎn)血清淀粉酶值較B組值降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 5.炎癥介質(zhì)測(cè)定結(jié)果：(1)NE含量：B組血清含量在各時(shí)間點(diǎn)較A組均明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；

9、B組血清NE含量在各時(shí)間點(diǎn)間隨時(shí)間延長(zhǎng)而增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；C組各時(shí)間點(diǎn)的NE含量較B組同時(shí)間點(diǎn)均降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。(2)IL-6含量：B組血清IL-6含量各時(shí)間點(diǎn)較A組均升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；B組血清IL-6含量各時(shí)間點(diǎn)間隨時(shí)間延長(zhǎng)而增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；C組血清IL-6各時(shí)間點(diǎn)的含量較B組同時(shí)間點(diǎn)均降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

10、　　 6.胰腺組織勻漿MPO測(cè)定結(jié)果：B組勻漿中MPO含量在各時(shí)間點(diǎn)較A組均明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；B組血清中MPO含量在各時(shí)間點(diǎn)間隨時(shí)間延長(zhǎng)而增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；C組各時(shí)間點(diǎn)的MPO含量較B組同時(shí)間點(diǎn)均降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 7.相關(guān)性分析：血清NE含量與胰腺組織病理學(xué)評(píng)分相關(guān)系數(shù)r=0.779，P＜0.05；血清IL-6含量與胰腺組織病理學(xué)評(píng)分相關(guān)系數(shù)r

11、=0.745，P＜0.05。表明，隨著NE、IL-6含量的增加胰腺組織損傷程度越嚴(yán)重。
　　 結(jié)論：
　　 1.聯(lián)合檢測(cè)血清中NE、IL-6水平對(duì)于早期判斷SAP嚴(yán)重程度有重要意義。
　　 2.SAP時(shí)，聚集、粘附在胰腺組織中的大量中性粒細(xì)胞通過釋放彈性蛋白酶造成胰腺損傷：中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶抑制劑西維來司鈉明顯減輕了這種損傷，對(duì)胰腺具有保護(hù)作用。
　　 第二部分西維來司鈉對(duì)大鼠重癥急性胰腺炎后急性肝損傷

12、保護(hù)作用的研究
　　 目的：探討大鼠重癥急性胰腺炎后急性肝損傷的發(fā)病機(jī)理及西維來司鈉對(duì)其急性肝損傷的影響。
　　 方法：建立大鼠重癥胰腺炎的模型，SD大鼠54只，雌雄不限.體重250～280g(河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)，編號(hào)904231，隨機(jī)分為3組，其中A組為空白對(duì)照組(n=18)，B組為模型組(n=18)，C組為藥物治療組(n=18)。每實(shí)驗(yàn)組又分3個(gè)時(shí)間點(diǎn)，為3h、6h、12h亞組，每時(shí)間點(diǎn)6只。本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M

13、采用經(jīng)十二指腸乳頭逆行膽胰管注射3.5％?；悄懰徕c的方法制備大鼠SAP模型；藥物治療組在制備SAP大鼠模型前進(jìn)行右側(cè)頸靜脈穿刺置管，待大鼠SAP模型成功后10分鐘，使用微量泵持續(xù)靜脈輸入西維來司鈉(5mg/100g/h)；空白對(duì)照組開腹，輕翻動(dòng)胰腺，空白對(duì)照組和模型組頸靜脈持續(xù)靜注與治療組等量等速度的生理鹽水(0.5ml/100g/h)。在模型制備完成后3h、6h和12h時(shí)間點(diǎn)，各6只大鼠。切取肝臟，觀察肝臟大體標(biāo)本，留取部分肝臟組織行

14、HE染色，進(jìn)行組織學(xué)觀察；分別測(cè)定血漿中天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、丙氨轉(zhuǎn)氛酶(ALT)濃度；肝臟組織血漿中超氧化物歧化酶SOD、丙二醛MDA的變化；應(yīng)用ELISA方法測(cè)定血清中NE、IL-6的含量。
　　 結(jié)果：
　　 1.組織病理觀察：大體觀察：B組肝表面彌漫性出血點(diǎn)伴局灶性壞死，肝臟體積增大，包膜緊張，色澤灰紅；C組肝臟體積增大，色澤灰暗；光鏡下肝臟病理組織學(xué)的改變：B組肝組織有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，氣球樣變性，肝細(xì)胞界限不

15、清，肝細(xì)胞胞漿呈顆粒狀，肝索變窄，匯管區(qū)內(nèi)炎性細(xì)胞明顯浸潤(rùn)，少量局造性壞死；C組肝病理改變明顯改善。
　　 2.(1)NE含量：(2)IL-6含量：(1)NE含量：B組血清含量在各時(shí)間點(diǎn)較A組均明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；B組血清NE含量在各時(shí)間點(diǎn)間隨時(shí)間延長(zhǎng)而增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；C組各時(shí)間點(diǎn)的NE含量較B組同時(shí)間點(diǎn)均降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。(2)B組血清IL-6含量各時(shí)

16、間點(diǎn)較A組均升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；B組血清IL-6含量各時(shí)間點(diǎn)間隨時(shí)間延長(zhǎng)而增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；C組血清IL-6各時(shí)間點(diǎn)的含量較B組同時(shí)間點(diǎn)均降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 3.SAP組與空白對(duì)照組相比，血清中AST、ALT的含量明顯增高(P＜0.05)，組織血漿中SOD水平明顯降低(P＜0.05)，MDA水平明顯升高(P＜0.05)，C組與SAP組相比，血清中AST、